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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】双杂交探针与溶解曲线分析
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wdy0330

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】双杂交探针与溶解曲线分析 已有1人参与

大家都知道，在荧光定量PCR中使用饱和荧光染料可对PCR产物进行高分辨率溶解曲线分析，其中的原理是比较简单的，较为容易理解。
同时在定量PCR中也可使用双杂交探针即是有两条探针，上游探针的3`端标记供体荧光基团，相邻下游探针的5`端标记Red 640受体荧光基团。当复性时，两探针同时结合在模板上，供体基团和Red640受体基团紧密相邻（距离1—5bp），激发供体产生的荧光能量被Red640基团吸收，使得检测探头可以检测到Red640发出波长为640的荧光。当变性时，两探针游离，两基团距离远，不能检测到640波长的荧光。
双杂交探针也可用于定量PCR后的溶解曲线分析，但对其中的原理一直不太了解，其是通过检测3‘端的荧光基团还是640荧光？检测得到的Tm值是完整DNA片段的还是上游探针结合片段或下游探针结合片段的Tm值？望高手指点！

[ Last edited by wdy0330 on 2010-7-20 at 10:42 ]
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1楼 2010-07-20 10:30:42
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wdy0330

铜虫 (初入文坛)

探针与曲线

自己回复下，没有高手了解吗？
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2楼2010-07-21 09:54:55
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wdy0330

铜虫 (初入文坛)
追加悬赏喽！
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3楼2010-07-21 17:05:23
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