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【求助/交流】双杂交探针与溶解曲线分析已有1人参与
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大家都知道，在荧光定量PCR中使用饱和荧光染料可对PCR产物进行高分辨率溶解曲线分析，其中的原理是比较简单的，较为容易理解。 同时在定量PCR中也可使用双杂交探针即是有两条探针，上游探针的3`端标记供体荧光基团，相邻下游探针的5`端标记Red 640受体荧光基团。当复性时，两探针同时结合在模板上，供体基团和Red640受体基团紧密相邻（距离1—5bp），激发供体产生的荧光能量被Red640基团吸收，使得检测探头可以检测到Red640发出波长为640的荧光。当变性时，两探针游离，两基团距离远，不能检测到640波长的荧光。 双杂交探针也可用于定量PCR后的溶解曲线分析，但对其中的原理一直不太了解，其是通过检测3‘端的荧光基团还是640荧光？检测得到的Tm值是完整DNA片段的还是上游探针结合片段或下游探针结合片段的Tm值？望高手指点！ [ Last edited by wdy0330 on 2010-7-20 at 10:42 ] |
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