应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌DH5α感受态细胞制备求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
202/2返回列表上一页12
查看: 3136  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mxbeaver

木虫 (著名写手)

浪滔滔~人渺渺~
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的DH5α有抗性么？改造过的么？
原始的DH5α没有抗性，在空白的LB或SOB平板上划线然后挑单菌落培养就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2010-07-20 15:21:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixian2404

银虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-25 08:19:02
在普通的LB 培养基上活化 24小时 然后再摇菌 按 1:100比例加入到新制备的LB液体培养基上 震荡培养2小时左右 到其OD值大概在0.4左右 冰浴30分钟  4度离心 10分钟去上清  按1:10的比例加入 TSS  再分装就是感受态细胞了
赞一下(2人) 回复此楼
WADE
12楼2010-10-24 17:36:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-25 08:19:11
个人用CaCl2法制备，挺好用的。步骤：过夜活化好的DH5α取1mL转接到新的液体LB中培养至OD600=0.4左右，冰浴30min，4℃、4000rpm离心收集菌体，第一次用冰浴0.1MCaCl2溶液重悬菌体，4℃、4000rpm离心收集菌体，冰浴30min，第二次用冰浴0.1MCaCl2+15%甘油重悬菌体，分装于1.5mL离心管100μL/管，-70℃冰箱保存备有半年。注意重悬菌体在冰浴中操作。
赞一下(2人) 回复此楼
海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！
13楼2010-10-24 23:47:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lee_Py

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主可以买嘛  还自己做啥
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2010-10-25 16:17:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tian1203

银虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by Lee_Py at 2010-10-25 16:17:34:
楼主可以买嘛  还自己做啥

谢谢，后来的做的几批都可以，之前做的多但不精
赞一下 回复此楼
别紧张，我不是什么好人...
15楼2010-10-26 10:25:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
将大肠杆菌DH5α贮存菌液在无抗的LB平板划线，37℃过夜培养；
挑取单菌落，接种于5ml LB液体培养基中，37℃，200-210rpm振荡培养过夜；
次日，按1%（v/v）接入新鲜的LB液体培养基，37℃，250rpm震荡培养至OD600为0.3-0.5左右；
将菌液加入事先预冷的无菌离心管中，冰上放置10min后，4℃，3,500rpm，离心10min；
弃上清，再将菌体悬浮于1/10体积的无菌、预冷的终浓度为20mmol/L的CaCl2和80mmol/L的MgCl2溶液中，4℃，3,500rpm，离心10min；
弃上清，再将菌体悬浮于1/50体积的预冷的0.1mol/L的无菌CaCl2溶液中，即为感受态细胞；
加入无菌甘油，使甘油最终含量达到15-20%；
分装于1.5ml的Eppendorf管中，液氮速冻后，于-80℃冰箱中冻存，备用。
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2010-10-26 10:46:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by shenlin0514 at 2010-07-20 15:11:18:
DH5a是不含抗性基因的大肠杆菌重组菌株，不能直接涂氨苄平板，建议采用qiagen的制备感受态方法，直接上qiagen网站找到download进行下载

我找了半天没找到啊，能具体点说下找qiagen的制备感受态细胞的方法吗
赞一下 回复此楼
好孩子！
17楼2012-02-28 15:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenlin0514

木虫 (正式写手)

无名小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
17楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-02-28 15:08:51:
我找了半天没找到啊，能具体点说下找qiagen的制备感受态细胞的方法吗

直接下载吧，我上传了
感受态制作溶液配方在50页TFB1和TFB2
制作方法在55页
赞一下(2人) 回复此楼
Never say never
18楼2012-02-29 16:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by shenlin0514 at 2012-02-29 16:07:57:
直接下载吧，我上传了
感受态制作溶液配方在50页TFB1和TFB2
制作方法在55页

你太好啦
回复此楼
好孩子！
19楼2012-02-29 16:46:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by shenlin0514 at 2012-02-29 16:07:57:
直接下载吧，我上传了
感受态制作溶液配方在50页TFB1和TFB2
制作方法在55页

你太好啦
回复此楼
好孩子！
20楼2012-02-29 16:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tian1203 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +4 一样YWY 2026-04-05 4/200 2026-04-05 16:43 by 来看流星雨10
[考研] 考研生物学考A区211，初试322，科目生化和生物综合，求调剂 +6 。。。54 2026-04-03 6/300 2026-04-05 14:54 by JOKER0401
[考研] 0703化学 +12 妮妮ninicgb 2026-04-04 13/650 2026-04-05 10:46 by 啊俊！
[考研] 283分求调剂 +7 小聂爱学习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 21:51 by hemengdong
[考研] 301求调剂 +18 骆驼男人 2026-04-02 18/900 2026-04-04 20:33 by 蓝云思雨
[考研] 085601，一志愿厦大334复试被刷求调剂 +13 曾仰之 2026-04-03 15/750 2026-04-04 20:13 by dongzh2009
[考研] [调剂信息]085408光电信息 求调剂 总分291分数一英一 +3 iz11az 2026-04-02 3/150 2026-04-04 19:09 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿华南师范361分，化学求调剂 +7 Nicole88888 2026-04-01 7/350 2026-04-04 18:28 by macy2011
[考研] 277工科求调剂 +7 1915668 2026-04-04 7/350 2026-04-04 17:21 by 啊俊！
[考研] 297求调剂 +11 ljy20040718！ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 09:23 by 来看流星雨10
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 08工科，295，接受跨专业调剂 +8 lmnlzy 2026-03-30 8/400 2026-04-03 13:08 by nalakaiqi
[考研] 初试成绩337找调剂 +3 ??? ?. ? 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:43 by 土木硕士招生
[考研] 262求调剂 +6 励志一定发文章 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:54 by linyelide
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考研] 298求调剂 +4 什么是胖头鱼 2026-03-30 6/300 2026-04-01 22:06 by 客尔美德
[考研] 326求调剂 +4 崽崽仔 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:58 by 我的船我的海
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
[考研] 求调剂 +10 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 10/500 2026-03-30 18:34 by 544594351
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭