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tian1203

银虫 (著名写手)

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专业: 生物化学

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌DH5α感受态细胞制备求助已有13人参与

原来的DH5α不好了，现在想重新接种。请问大家具体怎麽操作
直接在含AMP的平板上划线吗？培养多长时间？
先谢谢大家了！

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别紧张，我不是什么好人...

1楼 2010-07-19 14:24:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

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虫号: 769811
注册: 2009-05-14

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

将大肠杆菌DH5α贮存菌液在无抗的LB平板划线，37℃过夜培养；
挑取单菌落，接种于5ml LB液体培养基中，37℃，200-210rpm振荡培养过夜；
次日，按1%（v/v）接入新鲜的LB液体培养基，37℃，250rpm震荡培养至OD600为0.3-0.5左右；
将菌液加入事先预冷的无菌离心管中，冰上放置10min后，4℃，3,500rpm，离心10min；
弃上清，再将菌体悬浮于1/10体积的无菌、预冷的终浓度为20mmol/L的CaCl2和80mmol/L的MgCl2溶液中，4℃，3,500rpm，离心10min；
弃上清，再将菌体悬浮于1/50体积的预冷的0.1mol/L的无菌CaCl2溶液中，即为感受态细胞；
加入无菌甘油，使甘油最终含量达到15-20%；
分装于1.5ml的Eppendorf管中，液氮速冻后，于-80℃冰箱中冻存，备用。