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【求助/交流】大肠杆菌DH5α感受态细胞制备求助 已有13人参与
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原来的DH5α不好了，现在想重新接种。请问大家具体怎麽操作 直接在含AMP的平板上划线吗？培养多长时间？ 先谢谢大家了！  |
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将大肠杆菌DH5α贮存菌液在无抗的LB平板划线，37℃过夜培养； 挑取单菌落，接种于5ml LB液体培养基中，37℃，200-210rpm振荡培养过夜； 次日，按1%（v/v）接入新鲜的LB液体培养基，37℃，250rpm震荡培养至OD600为0.3-0.5左右； 将菌液加入事先预冷的无菌离心管中，冰上放置10min后，4℃，3,500rpm，离心10min； 弃上清，再将菌体悬浮于1/10体积的无菌、预冷的终浓度为20mmol/L的CaCl2和80mmol/L的MgCl2溶液中，4℃，3,500rpm，离心10min； 弃上清，再将菌体悬浮于1/50体积的预冷的0.1mol/L的无菌CaCl2溶液中，即为感受态细胞； 加入无菌甘油，使甘油最终含量达到15-20%； 分装于1.5ml的Eppendorf管中，液氮速冻后，于-80℃冰箱中冻存，备用。 |
16楼2010-10-26 10:46:25
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2楼2010-07-19 14:37:59
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silicare(金币+1):谢谢参与 2010-10-25 12:26:53
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3楼2010-07-19 14:41:51
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lstt09nk(金币+1):欢迎常来~~ 2010-07-19 17:38:17
lstt09nk(金币+1):欢迎常来~~ 2010-07-19 17:39:29
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4楼2010-07-19 14:44:10
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