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tian1203

银虫 (著名写手)

应助: 5 (幼儿园)
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红花: 34
沙发: 3
帖子: 2957
在线: 1166.3小时
虫号: 1051352
注册: 2010-07-03
性别: GG
专业: 生物化学

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌DH5α感受态细胞制备求助已有13人参与

原来的DH5α不好了，现在想重新接种。请问大家具体怎麽操作
直接在含AMP的平板上划线吗？培养多长时间？
先谢谢大家了！

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别紧张，我不是什么好人...

1楼 2010-07-19 14:24:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星

应助: 1 (幼儿园)
金币: 631.4
散金: 17
红花: 1
帖子: 378
在线: 82.4小时
虫号: 460911
注册: 2007-11-18
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-25 08:19:11

个人用CaCl2法制备，挺好用的。步骤：过夜活化好的DH5α取1mL转接到新的液体LB中培养至OD600=0.4左右，冰浴30min，4℃、4000rpm离心收集菌体，第一次用冰浴0.1MCaCl2溶液重悬菌体，4℃、4000rpm离心收集菌体，冰浴30min，第二次用冰浴0.1MCaCl2+15%甘油重悬菌体，分装于1.5mL离心管100μL/管，-70℃冰箱保存备有半年。注意重悬菌体在冰浴中操作。