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【求助/交流】SOS！转基因小鼠制备中的遇到的问题已有1人参与
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SOS！ 本人从事小鼠转基因研究，目前在实验中遇到一些棘手的问题。论坛里是否有从事转基因小鼠研究的大虾？是否有从事小鼠胚胎发育研究的大虾？是否有从事微生物研究的大虾？请大家帮帮忙。 问题描述如下： 做转基因小鼠研制需要从超排的母鼠体内取受精卵，然后再将制备好的DNA显微注射到小鼠受精卵的原核中。我以前取的卵质量都还比较好，但最近取的小鼠受精卵总感觉质量不佳。用倒置显微镜（400倍）观察卵，在透明带与细胞膜之间，有一些极小的黑点在运动，运动速度不快，但确实有，感觉像细菌。此时观察培养卵的液滴，无黑点运动，培养液清亮无污染。 这样的卵经过显微注射后，在第二天观察，有些卵内黑点明显增多。有些经过2-3天培养后观察，卵内（透明带与卵的分裂球之间）可见大量黑点运动，判断应该是大量细菌繁殖。卵已经死亡。 但此时在观察同批的培养液，仍清亮，无黑点（无细菌污染），感觉卵内的细菌不像是因污染的培养液而进入透明带。 本人非常困惑，小鼠的受精卵由于是由正常的母鼠产生的，其体内有一套良好的免疫系统，应该不会有细菌会在卵子形成早期就侵入受精卵内，而且，这些卵外层的透明带完好无破损，就算培养液有污染，一般细菌也很难侵入到透明带之内。 这些细菌从何而来？由何产生？是何种类？急盼高人指点迷津啊~~~！ 附：我们的实验室设置在万级净化的实验室内，培养液制作等操作在超净台中完成，操作过程很小心。实在非常困惑这些细菌的来历啊…… |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+10):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-11 23:54:22
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scelab(金币+10):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-11 23:54:22
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首先有一点是确定的，体内取的受精卵绝不可能在卵周隙中长有细菌。因此，说是细菌有些不大可能，可排除。 没见到实际的图像，不好做出判断，只能推测。 有时卵周隙会有极体的碎片，但与你的描述明显不符，可排除。如果你是在扎前看到，并且每个胚胎都这样，那最可能的是操作不当导致受精卵崩解了（但受精卵比卵母细胞结实的多，一般的操作都能耐受）。如果你是在扎后看到，最大的可能是膜已破，胞质流出了，这样的胚胎有时可维持形态大约20-30min，然后崩解。你提到这些胚胎还可以卵裂，是很奇怪的，我很怀疑那是碎片，有清晰的图发几个上来吗？ 如果再采到这样的受精卵，lz可以直接培养，即使细菌污染，胚胎也能发育到2细胞的，如果培养后不能得到卵裂球边缘轮廓清晰的2细胞胚胎，那就是受精卵崩解了。反之，那就只可能是第三个原因了。 |
2楼2010-10-11 22:08:23