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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于电转酵母X33的问题
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王雨云

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于电转酵母X33的问题 已有7人参与

我的表达载体是用的PPICZa，现在电转酵母X33感受态细胞，电压2000v,通电时间3~5ms,但是电转了很多次都得不到阳性转化子。电转的结果要么是不长菌，要么是正常时间里（隔一天长菌）长菌，但是菌落PCR检测全为阴性，不知道还有什么因素会影响电转效率？？（基本可以确定我的感受态效果较好，线性化的产物浓度也很大，每80ul感受态加入10ul线性化产物）
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1楼 2010-07-06 18:08:01
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whove2012

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也是用酵母x-33，质粒时pPICZαA,用博来霉素筛选，长出的菌很少，挑备份点板时长得很慢（备份板有加博来霉素），提酵母基因组的菌液也是长得很慢，不知道为什么？实验室其他的人只是外援基因不一样，但他们的就长得很快
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12楼2014-10-29 10:52:30
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
王雨云(金币+1):谢谢参与
王雨云(金币+1): 2010-07-07 07:43:31
貌似你以前咨询过这个问题吧
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2楼2010-07-06 18:20:38
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
王雨云(金币+1):谢谢参与
王雨云(金币+1): 2010-07-07 07:43:37
你用什么buffer重悬酵母的？是不是电阻太小，导致电流过大？
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3楼2010-07-06 19:46:23
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旋木晴晴

金虫 (小有名气)

妞妞
★
王雨云(金币+1):谢谢参与
楼主怎么确定你的感受态没问题？建议电转后加山梨醇30°保温时间适当延长。
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4楼2010-07-06 20:40:08
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