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【资源】经验：如何防止HPLC或CapLC的污染 已有4人参与
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最小化或者减少背景污染物的建议：所有的仪器分析 溶剂和酸、碱、缓冲盐都是化学品，没有一种是100%纯的。因此，在LC/MS中总是存在着一些化学背景。为了改善数据质量，将干扰以及背景噪音减少到最小是非常值得考虑的。在此我们给大家提出一些小建议，供大家分析 参考。同时也欢迎您也把工作当中的经验和小窍门提供给大家，以便让更多的用户一起分享! 1. 溶剂和添加剂: a. 使用最高纯度的试剂 – HPLC 级或更高纯度。 i. 最好使用Fisher Optima grade 1. 有些分析化学HPLC 级试剂含有聚乙二醇类(PEG)化合物. 紫外检测器无法检测它们的存在。 2. 有些HPLC级试剂含有铁离子 (Fe+3) ii. 水可能是污染物的一个主要来源 3. 必须对在线的纯水系统(Milli-Q)进行维护。18 M欧姆的水也不是完全没有有机污染物的。 4. 瓶装水不一定比Milli-Q制得的水更好，因为在瓶装水开启以后，它可能会积聚污染物。 5. 不推荐在塑料容器内储存水。 6. 将水通过一根干净的C18色谱柱以除去有机物质而进一步纯化，这可以通过仪器分析一个高压二元梯度和一根C18的保护柱而在线进行。 b. 添加剂，例如乙酸可能含有大量的铁。100ppb听起来似乎是很低的浓度，可是，100ppb=100ng/L或者100pg/mL。 i. 乙酸所形成铁的加合物会导致强的ESI+ 质谱图。 ii.甲酸已被证明含有较少的铁离子。 c. 加入最低浓度的添加剂，可以减少化学背景噪音、增加信噪比和灵敏度。 2. 装样品和溶剂的容器 a. 瓶子和盖子，样品提取板： i. Waters 样品瓶是经过质量控制的， 其他品牌可能没那么洁净。 ii. 带垫片的样品瓶盖，因含有塑胶或者粘合剂，可能会污染自动进样器。 iii. 样品提取板是塑料材质的，可能有增塑剂释出 (例如邻苯二甲酸二辛酯污染物)。 iv. 样品提取板胶合金属箔片的盖子可能会有粘合剂物质流失。 b. 玻璃器皿 i. 用普通的洗涤剂洗涤后，玻璃器皿上可能有洗涤剂残留(聚乙二醇类化合物) 及其它 “粘性的” 物质污染 ii. 应该用即将使用的流动相品质的试剂进行冲洗。 c. 塑料容器或管路: 不要将溶剂或者水储存于塑料的溶器中 (因为其中会如邻苯二甲酸二辛酯污染物)。 3.护手霜 d. 含聚乙二醇类化合物、油脂、维生素等等。 e. 在处理能够接触流动相或者样品的HPLC部件时，请戴手套。 两篇不错的资料，也许对大家会有帮助：《液相出峰异常解决方法》 《色谱柱规范化管理和保养的经验》 4.样品以及样品基质 f. 样品基质中可能含有盐和其它不期望带入的物质。当制备针头清洗液的时候，必须考虑基质的溶解性。 i. 无机盐类在高有机相比例的溶液中是不溶解的，分析 避免使用含有Na+、K+ 、PO4-3的缓冲液，因为它们是不挥发的。含NH4+ 的醋酸盐或者甲酸的缓冲液具有挥发性，并且是与MS兼容的。 ii. 蛋白质 (例如组织，血液或者血清样品中的) 在高有机相溶液中(>40%)会沉淀，沉淀的蛋白质会阻塞进样器和管路，而且会吸附待测物或者污染物。 g. 制备样品所用的化学品(例如：洗涤剂、盐) 等会产生出巨大的不希望出现的离子。分析化学样品净化富集的方式需要与LC/MS相协调。 h. 待测物的溶解度可能是一个问题。如果样品在高有机相溶液中不溶解，在被注入初始的低有机溶剂的流动相中，一些待测物可能会在流动相中析出，并污染进样器或色谱柱，然后当下一个梯度进行时，它们可能会再溶解。 i. 在进样时浓度非常大的样品可能会污染进样器。在查看样品中0.1%水平的杂质时，因需要注入足够多的样品来查看，这样的情形就很可能发生。 |
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