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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请虫友帮忙看看这个EMSA的图片，给点意见1
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】请虫友帮忙看看这个EMSA的图片，给点意见1 已有7人参与

刚刚做的EMSA结果如下图所示：

我有几个疑惑，请帮忙看看是什么原因:
1.点样孔中有信号，why？
2.梳子齿间的PAGE胶上也可能被同位素标记的探针污染，怎么避免？
3.A,B,C分别是什么？如果A是结合了蛋白的probe，C是free Probe的话，那B是什么？
（电泳过程中发现缓冲液上层电泳缓冲液会渗漏，会不会是因为漏了之后没有及时加上，导致Free probe跑出来几条带来？）
前天的结果没有以上这几点，也不知道是什么原因。忘高手解答！
谢谢！
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1楼 2010-07-03 17:18:48
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26264716

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1：点样孔信号时因为空中有杂质，堵孔了，可以在电泳前用针吹吹，然后反向电泳10min。
2：应该是横向电流。。
3：应该是探针不纯吧，我做RNA探针，有时会有非特异性转录。你探针浓度太大了点。。
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苦，才是人生
6楼2013-04-11 13:50:49
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-07-05 08:40:00
原因：电泳缓冲液渗漏
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3楼2010-07-05 04:51:28
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寂寞之巅

铁虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~ 2010-07-05 11:17:23
点样孔中有信号 是因为有部分DNA没有进入胶里 是很正常的情况


梳孔间有信号 很有可能是产生了横向电流
赞一下(2人) 回复此楼
好好学习，天天向上
4楼2010-07-05 09:20:19
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ZXWAN

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
从你的图上看，不只3条条带，应该是4条，A、B和C上面的那条条带应该都是DNA与蛋白结合的条带，怀疑A以外的两天应该是非特异性结合的条带。你可以通过点突变实验验证下那条是特异性的。
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7楼2013-08-05 16:21:37
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