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zlnd

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[交流] 【求助/交流】细菌的扫描电镜前处理，问题何在已有1人参与

1、取材：细菌（大小：0.5 * 1~2 um，离心（4 ℃，10000 rpm，10 min）培养液获得菌体；
2、固定：4 ℃下，2.5 %戊二醛4小时，然后离心去除固定液；
3、离心清洗：磷酸盐缓冲液（0.1 mol,pH 7.0,用了少量硫酸和氢氧化钠调pH），3次；
4、离心脱水：递增梯度乙醇，每级先静置5-15 min，而后离心；
5、置换：叔丁醇（化学纯），常温静置15 min，4 ℃离心，叔丁醇成固态，难道要在25 ℃以上离心吗，这样我担心会影响菌体，可以怎么处理呢？（叔丁醇换成醋酸戊酯，是不是一个方法）？
6、原本打算用真空冷冻干燥的！
大家赐教呀，急切请求！

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1楼 2010-06-30 01:15:04

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scelab

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★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-30 08:40:11

引用回帖:

Originally posted by zlnd at 2010-06-30 01:15:04:
1、取材：细菌（大小：0.5 * 1~2 um，离心（4 ℃，10000 rpm，10 min）培养液获得菌体；
2、固定：4 ℃下，2.5 %戊二醛4小时，然后离心去除固定液；
3、离心清洗：磷酸盐缓冲液（0.1 mol,pH 7.0,用了少量硫酸和 ...

偶做透射电镜，从平板上刮下菌来，用水稀释下，然后用特殊取样片蘸点菌，烘干，再用醋酸双氧铀泡下，然后直接电镜去了。。。

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