24小时热门版块排行榜    

查看: 3174  |  回复: 17

风荻

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
双酶切可能是空间位阻的问题。单酶切分步回收可能会自连,还有就是你酶切的质粒有多少啊,会不会回收效率低,第二次回收后有但看不见了?   你分步酶切一次回收的话,酶要60°以上灭活一下的吧,buffer再加3ul就可了。     祝你成功!!!
11楼2010-06-30 10:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiminhb

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以单酶切后用NaAc-无水乙醇沉淀回收,然后用另一个酶酶切
12楼2010-06-30 10:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张力民1598

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我怎么记得是H buffer
13楼2010-06-30 13:16:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有那个必要,
14楼2010-07-01 16:22:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mark32280667

新虫 (初入文坛)

多做几次,、、

拿分走人
15楼2010-07-01 16:22:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

以前我也遇到过这样的问题,第一个酶切后过柱子回收损失太多,可以采用乙醇沉淀的方法进行回收。建议先用其中一个酶进行酶切,结束后乙醇沉淀DNA,然后进行第二个酶切,然后胶回收、连接、转化。

附:乙醇沉淀protocol(具体原理可参照分子克隆)

加入0.1倍体积的乙酸钠(3M,pH5.2),然后加入2倍体积的乙醇,混匀后置4℃作用30min,12000rpm离心10min,倒掉上清,余下的沉淀即为DNA,可能肉眼不可见。开盖放置一段时间,让乙醇充分挥发,以免影响后续试验。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
16楼2010-07-01 16:27:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gsf313

铁虫 (小有名气)

非常感谢大家的留言、帮助,我用“月月大可”同学说的方法试做了下,现在成功了,真是非常的高兴和激动啊!!下面的实验,我会继续努力,有问题还会来请教大家!

谢谢小木虫,谢谢各位热心同学,希望大家都能有突破,多发好文章!
17楼2010-07-01 23:00:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

混水小虫

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
984366楼: Originally posted by 月月大可 at 2010-06-26 12:06:48
可以尝试一下第一次酶切完回收的时候不要电泳,而是直接加入溶胶Buffer,然后挂柱子,一下做法完全按照说明书操作。洗脱的时候小体系。30微升甚至都可以20-25微升,洗下来后全部用于第二次酶切。第二次酶切结束后电 ...

你好!我最近也准备着手做分步双酶切,有个问题想请教一下你。在第一次单酶切后,有没有进行去磷酸化处理啊?还是直接进行纯化回收了?谢谢!!
期待,美好的生活!!
18楼2012-11-29 21:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gsf313 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧! +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿,明天官网会通知放榜? +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
请填处理意见