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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何提高DNA的浓度
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听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

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[交流] 【求助/交流】如何提高DNA的浓度 已有3人参与

建立的construct 需要做原生质体融合，construct的浓度至少需要1000ng/ul,而我手头上的这个只有250ng/ul左右。
是不是用ethanol 离心还是什么的。。。不懂得方法。。。请指教，谢谢了
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开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。
1楼 2010-06-23 22:10:33
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听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

优秀版主优秀版主
Materials

3M Sodium Acetate buffer, pH 5.2 (store at 4 °C)
Cold 100% Ethanol (-20°C)
Cold 70% Ethanol in sterile dH2O (-20°C)
DNA sample
4 °C Microcentrifuge (normal microcentrifuge in cold room works fine). All centrifugations should be on "soft" (no brake) setting.


Procedure

1.Transfer DNA to a container where it fills one fourth the total volume (a 500 µL tube should have no more than 125 µL of DNA solution, for example)
2.Add one tenth volume of Sodium Acetate buffer to equalize ion concentrations
3.Add at least two volumes of cold 100% ethanol; let stand in -20°C freezer for at least one hour
4.Centrifuge sample for 15 minutes at highest speed in a 4°C microcentrifuge
5.Remove as much supernatant as possible with a 1 mL micropipet; recentrifuge, then remove the rest with a 200 µL pipet
6.Add 200 µL of cold 70% ethanol; centrifuge for 5 minutes in a 4 °C centrifuge
7.Remove supernatant with a 200 µL pipet; evaporate remaining ethanol in a 37 °C water bath
8.Resuspend pellet in desired volume of water or TE buffer


后来，我用的方法
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开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。
7楼2010-06-28 22:56:34
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-29 04:31:31
有核酸共沉剂可以买，除了沉淀剂之外，还有一些糖之类的可以使得沉淀物肉眼可见方便回收
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2楼2010-06-23 22:23:24
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听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

优秀版主优秀版主
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-06-23 22:23:24:
有核酸共沉剂可以买，除了沉淀剂之外，还有一些糖之类的可以使得沉淀物肉眼可见方便回收

GG如果不用你说的方法，还有其他招没
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开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。
4楼2010-06-24 01:01:56
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ququr008

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-29 04:31:50
非常简单，就是沉淀之后重新溶解就是了，没有什么太复杂的啊！至于说要提高得率，方法也很多，分子克隆里面的方法可以参考。另外，加糖原也是可以的。但是具体选择什么方法还是要根据你自己回收DNA之后的目的而定。
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5楼2010-06-24 01:26:05
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