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彤彤0122

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】氧气会不会使某些酶失活?? 已有6人参与

我现在在表达一个酶,在大肠中,基因已经表达,而且是可溶性的,但是没有酶活,有的文献上说这个酶对氧气敏感,诱导和反应全要在厌氧条件,基因来源是厌氧梭菌,和我的基因来源是同一属的。氧气会不会是对酶有那么大的影响呢?
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月月大可

木虫 (著名写手)

★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 14:34:55
引用回帖:
Originally posted by 彤彤0122 at 2010-06-23 13:46:37:


其实我现在觉得是二硫键被氧气破坏掉也是文献上说的,文献上是厌氧诱导,但是厌氧诱导非常麻烦,还得不断调整PH,破壁什么都很麻烦。
你说用DTT,那样的话能恢复二硫键吗?

我平常使用的β-ME还是DTT都是为了半胱氨酸处于还原状态,至于这两种东西能不能打开已经错误形成的二硫键不清楚,不敢给出结论。

DTT这种东西还原性太强,如果后期蛋白要使用Ni柱纯化,就不能使用这种东西。能把Ni离子给还原了,柱子由原来的蓝色直接变成褐色。β-ME可使用在5mM,基本不会影响(GE公司说他们的填料可以耐20mM)。
11楼2010-06-23 13:55:16
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lovehpw

金虫 (小有名气)

★
1949stone(金币+1):固氮酶 2010-06-21 16:23:01
氧气会使某些酶失活的
3楼2010-06-21 13:31:32
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

有些酶不能接触氧的
4楼2010-06-21 17:54:10
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zhouhou

捐助贵宾 (小有名气)


有些酶对温度,氧气,ph值是很敏感的,所以你可以看下
5楼2010-06-21 18:58:05
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