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【求助】请教：液相，检测问题？ 已有4人参与
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近做一个分子量在70KD左右的糖蛋白， 用色谱柱的型号是TSK G2000 SWXL,7.8*300mm) 流动相： 40mmol/L磷酸盐缓冲液，300mmol/LnaCl PH:6.8用0.22um过滤膜过滤 色谱条件： 流速0.5ml/min,上样量20微升 柱温： 20-25度 紫外检测波长： 280nm 系统压力： 29~31bar 步骤是： 1.分别用甲醇、超纯水冲洗系统至基线平衡，（柱子用甲醇保存） 2.换配置好的流动相以0.5ml/min平衡色谱柱到基线平衡。 3. 取样品20微升上样品，(经过0.22um滤膜过滤，)记录时间40min， 4.这个柱子用了一年多，一直没有用预柱。 结果色谱峰拖尾严重，一直都是这样，对称因子达不到药典的要求，塔板数也不够。 这个柱子用甲醇保存过，也用叠氮钠保存过，现在怀疑是不是柱子塌陷？ 我们用另外一个样品（人血白蛋白）做对照时就不存在拖尾现象，但是测试这个样品就拖尾严重，请高手指点， 或者有哪位战友也用过这个柱子的传授一下是怎么保养柱子的，实验方法怎样？另外这个柱子能否反冲？ 这是所测样品的色谱图（拖尾严重）；  另外一个是采用同样方法测得人血白蛋白样品，基本无拖尾。  |
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