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lfgc8505

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 11.3小时
虫号: 432774
注册: 2007-08-12
性别: GG
专业: 疫苗学

[交流] 【求助/交流】PFU扩不出东西来，请各路大侠帮帮小虫啊~~~~~~~ 已有11人参与

最近在做PCR，因为要扩的片段比较长，1800BP.用专扩长片段的LA酶扩了，效果可以，但是测序发现有突变，因为我要求不能有突变，所以没用。改用promega的PFU后，怎么都扩不出东西来，退火温度都试了（50-65），之前用的是57度都能扩出来。
我的反应程序，是95 3分钟
            95 30秒
            50/65 30秒
            72 4分钟 30个循环
            72 10分钟
            反应体系使用的是说明书上的推荐体系。

但是就是没有我的目的条带，只有两条约800和300的杂带！

崩溃了，这马上又要回报了，还是做出来啊~请各路虫友帮帮忙啊。发表一下你们的高建啊！
小虫不胜感激！

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