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luoqinfly

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】请教紫外吸收波长的问题 已有7人参与

最近在做雷帕霉素的紫外吸收时发现,当浓度为1mg/ml时其最大吸收波长与文献相差较大,吸收波形异常;当降低浓度后又回复正常,我想请问一下这是为什么呢?是一个什么原理导致的?请各位大侠不吝赐教!
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qingyy

木虫 (正式写手)

luoqinfly(金币+5): 2010-06-16 21:09:29
当浓度为1mg/ml时做紫外光谱的浓度就太大了,在这个浓度做出来的紫外光谱是不可靠的。
出现这种情况是正常的。首先你一定明白紫外光谱产生的原理。是由于化合物的电子吸收了紫外光的能量发生了电子跃迁引起。那么,紫外光谱仪器是根据它的工作原理来设计的,仪器的一般是光学零位平衡法或电学零位平衡法,其原理在这里一两句说不完。
测定时候,样品的浓度大,吸收就强。但是有一点,仪器的光源能量是有限的,不可能无限制的把样品的浓度加下去。当样品的浓度大到一定程度,超过了它的极限,就像几乎所有光都被样品吸收了的时候,就出现你上面说的情况了。在这种情况下,好比你使用玻璃片挡住了紫外光,吸收波形就异常,或出现不规则的乱线条。
得意时平淡谦和,失意时志存高远。
8楼2010-06-16 19:49:01
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inan

金虫 (小有名气)

★
pplover(金币+1):感谢参与! 2010-06-16 17:10:21
luoqinfly(金币+1): 2010-06-16 21:08:18
浓度太大,吸光度太大,图形失真吧,降低浓度,控制吸光度在0.2-1左右谱图效果比较好~
2楼2010-06-16 08:07:32
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sunxiaoli

木虫 (著名写手)

★
pplover(金币+1):感谢参与! 2010-06-16 17:15:25
luoqinfly(金币+1):非常感谢你的热心帮忙 2010-06-16 21:08:53
一般浓度大点不至于连波长都位移吧,可能是溶剂效应、共轭效应什么引起的,看你具体怎么做的了
3楼2010-06-16 08:56:46
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xkp123

木虫 (著名写手)

★ ★
pplover(金币+2):感谢参与!原理都说的那么清楚,呵呵…… 2010-06-16 17:16:04
luoqinfly(金币+1): 2010-06-16 21:09:00
浓度太大,有可能使得样品变成高聚物,又由于空间位阻效应使得共轭效应降低,因而最大吸收波长会发生移动
4楼2010-06-16 10:21:31
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