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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】真是急死个人啊，实验啊实验
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sand0811

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】真是急死个人啊，实验啊实验 已有7人参与

卡在这边好几个月了，怎么也想不到是怎么回事……
微卫星引物筛选。用AFLP的方法双酶切连接（酶切连接同时进行），然后进行磁珠吸附等步骤，一个测序结果包括好多的接头序列，支离破碎啊……哪位好心的前辈来指点指点……
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1楼 2010-06-08 11:09:34
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张力民1598

铜虫 (小有名气)
没做过，学习一下
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2楼2010-06-08 11:23:18
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
应该学习，实验无止境！
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梦在路就在！
3楼2010-06-08 11:34:18
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):感谢分享经验 2010-06-08 14:07:13
磁珠是streptavidin包被的么？接头生物素化过了？
出了问题，酶切和连接最好分开做了

最后切胶l了么？有没有切到杂带？
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4楼2010-06-08 12:09:17
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sand0811

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-08 12:09:17:
磁珠是streptavidin包被的么？接头生物素化过了？
出了问题，酶切和连接最好分开做了

最后切胶l了么？有没有切到杂带？

磁珠和生物素都应该是没问题的……切胶回收的时候尽量切的片段都比较长，500bp以上到1000bp，关键是杂带的话也不应该是到处都有接头呀，这个事情很诡异~难道是酶切连接的时候切开自己又连上了？
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5楼2010-06-08 14:25:47
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
我做了一个pcr一个月也是没有结果，郁闷，现在正在休息，祝福啊~
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
6楼2010-06-08 15:33:14
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林翘

木虫 (著名写手)
我不知你为什么要把酶切和连接放在一起做！我个人实验经验告诉我，连接时有杂质难连上。是不是你有什么新手段？请教了。
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7楼2010-06-08 15:42:13
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-08 22:52:00
sand0811(金币+30):太谢谢了，如此耐心~ 2010-06-09 09:43:35
还是建议酶切连接分开做，体系对酶切影响不大，但是Ligase还是比较挑剔环境的。

而且测序结果倾向于说明连接体系有问题
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8楼2010-06-08 17:15:11
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yinbo2002

银虫 (小有名气)
接头不对吧。
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9楼2010-06-08 23:19:09
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sand0811

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 林翘 at 2010-06-08 15:42:13:
我不知你为什么要把酶切和连接放在一起做！我个人实验经验告诉我，连接时有杂质难连上。是不是你有什么新手段？请教了。

是我们这里一个实验室做AFLP是这么做的~现在我有点怀疑这个方法不太靠谱了……
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10楼2010-06-09 09:40:06
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