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1楼2010-06-08 11:09:34

张力民1598

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没做过，学习一下

2楼2010-06-08 11:23:18

雪山飞狐7233

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应该学习，实验无止境！

梦在路就在！

3楼2010-06-08 11:34:18

ben1147

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1949stone(金币+1):感谢分享经验 2010-06-08 14:07:13

磁珠是streptavidin包被的么？接头生物素化过了？
出了问题，酶切和连接最好分开做了

最后切胶l了么？有没有切到杂带？

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4楼2010-06-08 12:09:17

sand0811

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引用回帖:

Originally posted by ben1147 at 2010-06-08 12:09:17:
磁珠是streptavidin包被的么？接头生物素化过了？
出了问题，酶切和连接最好分开做了

最后切胶l了么？有没有切到杂带？

磁珠和生物素都应该是没问题的……切胶回收的时候尽量切的片段都比较长，500bp以上到1000bp，关键是杂带的话也不应该是到处都有接头呀，这个事情很诡异~难道是酶切连接的时候切开自己又连上了？

5楼2010-06-08 14:25:47

天使托

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我做了一个pcr一个月也是没有结果，郁闷，现在正在休息，祝福啊~

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6楼2010-06-08 15:33:14

林翘

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我不知你为什么要把酶切和连接放在一起做！我个人实验经验告诉我，连接时有杂质难连上。是不是你有什么新手段？请教了。

7楼2010-06-08 15:42:13

ben1147

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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-06-08 22:52:00
sand0811(金币+30):太谢谢了，如此耐心~ 2010-06-09 09:43:35

还是建议酶切连接分开做，体系对酶切影响不大，但是Ligase还是比较挑剔环境的。

而且测序结果倾向于说明连接体系有问题

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8楼2010-06-08 17:15:11

yinbo2002

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接头不对吧。

9楼2010-06-08 23:19:09

sand0811

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引用回帖:

Originally posted by 林翘 at 2010-06-08 15:42:13:
我不知你为什么要把酶切和连接放在一起做！我个人实验经验告诉我，连接时有杂质难连上。是不是你有什么新手段？请教了。

是我们这里一个实验室做AFLP是这么做的~现在我有点怀疑这个方法不太靠谱了……

10楼2010-06-09 09:40:06