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ottolzm

木虫 (正式写手)

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专业: 微生物生理与生物化学

[交流] 【求助/交流】求助，各位大侠一个问题？已有1人参与

本人是做基因工程菌的，得到一段编码酶T的基因Sprt(文献报道)，之后同数据库中的序列进行比对，发现在NCBI中有一株链霉菌A，其名称和实验室保留一株链霉菌B一模一样（只是编号差别），在链霉菌A中存在一段编码酶T的相似基因C(798bp，同Sprt相似度78.9%)及编码酶T相似蛋白酶的基因D（831bp，同Sprt相似度44.4%）。
之后我对实验室保留的链霉菌测定了酶T的活性(采用酶T的专一性底物)，测到了酶活（酶学动力曲线很标准，一级反应动力学方程线性值为0.9998），随后我根据链霉菌A中的基因C和基因D设计引物，设想从实验室保存的链霉菌B中对C和D基因进行PCR，之前在论坛内请教了若干好心人，今天进行了PCR(DNA taq是BBI的DNA Taq 聚合酶)，电泳之后发现PCR条带大小不对，本来是798bp和831bp，电泳条带却在1500bp处很亮。想请教大家，首先，一。我这样的思路是否有问题(因为在链霉菌B中存在一段酶基因TG，已经测序，当将其同链霉菌A的全基因组序列进行比对时，却没有相似的序列显示，而且推断的蛋白质中也没有TGase)? 二。如果出现了问题，是否引物有问题，或者是别的原因？三。如果换一种PCR聚合酶是否会对结果有所改变？
谢谢大家的无私帮助，谢谢大家！！！

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