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【求助】求助：细胞实验用FFA的配制 已有5人参与
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各位虫友，你们细胞实验时要用到FFA时，如何进行配制啊？ 我在网上查了好多方法，还有一些国内的文献，都说配制前，先用乙醇或石油醚溶解一定质量的脂肪酸，装进一个干净的瓶子中。氮气吹干，然后用0.15M KOH溶解。即可以使用。如果需要使用BSA，则事先和溶解于PBS中定量的BSA溶液按比例混合。 还有几篇文献中是这样的： FFA溶液的制备 （文献一）：FFA贮备液中油酸与棕榈酸的比例为2∶1。溶解所需剂量的油酸和棕榈酸于10 mL 99%酒精中，振摇1 h。每10 mmol/L FFA加入40 μL的NaOH（10 mol/L），混匀，置于通风橱中过夜干燥。加入10 mL蒸馏水，加热溶液至呈透明皂液样时，加入40 mL冰冷的10%小牛血清白蛋白，混匀。经0.22 μm CA过滤器过滤消毒后将FFA贮备液存于-20 ℃。 FFA 的配制（文献二）:取棕榈酸 ,用乙醇配制成 100 mmol/ L的浓度;取不含 FFA 的牛血清白蛋白 ,用蒸馏水配制成 10 %的溶液;取 50μl 100 mmol/ L FFA 溶液 ,加入上述10 %BSA 溶液中 ,在55 ℃水浴中静置15 min ,直至溶液澄清 , - 20 ℃保存。 在这里我想问：为什么要用氮气吹干呢，用超净工作台上的风把它吹干行吗，先将其溶解又将其吹干的道理是什么？用乙醇只是溶解而没有发生化学反应生成乙醇酯吧？乙醇是不是在挥干的过程中全部挥发了？用乙醇溶解后FFA的浓度一般是多少？还有一定要加BSA吗？如果我不加呢？加入BSA的原理又是什么？配制时NaOH和FFA的比例又是多少呢？配制好后为何会出现浑浊？ 望哪位高手能帮我解答一下，万分感谢！！ |
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