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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 【求助】求助：细胞实验用FFA的配制
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394210516x

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】求助：细胞实验用FFA的配制 已有5人参与

各位虫友，你们细胞实验时要用到FFA时，如何进行配制啊？

我在网上查了好多方法，还有一些国内的文献，都说配制前，先用乙醇或石油醚溶解一定质量的脂肪酸，装进一个干净的瓶子中。氮气吹干，然后用0.15M KOH溶解。即可以使用。如果需要使用BSA，则事先和溶解于PBS中定量的BSA溶液按比例混合。


还有几篇文献中是这样的：
FFA溶液的制备 （文献一）：FFA贮备液中油酸与棕榈酸的比例为2∶1。溶解所需剂量的油酸和棕榈酸于10 mL 99%酒精中，振摇1 h。每10 mmol/L FFA加入40 μL的NaOH（10 mol/L），混匀，置于通风橱中过夜干燥。加入10 mL蒸馏水，加热溶液至呈透明皂液样时，加入40 mL冰冷的10%小牛血清白蛋白，混匀。经0.22 μm CA过滤器过滤消毒后将FFA贮备液存于-20 ℃。

FFA 的配制（文献二）:取棕榈酸 ,用乙醇配制成 100 mmol/ L的浓度;取不含 FFA 的牛血清白蛋白 ,用蒸馏水配制成 10 %的溶液;取 50μl 100 mmol/ L  FFA 溶液 ,加入上述10 %BSA 溶液中 ,在55  ℃水浴中静置15 min ,直至溶液澄清 , -  20  ℃保存。


在这里我想问：为什么要用氮气吹干呢，用超净工作台上的风把它吹干行吗，先将其溶解又将其吹干的道理是什么？用乙醇只是溶解而没有发生化学反应生成乙醇酯吧？乙醇是不是在挥干的过程中全部挥发了？用乙醇溶解后FFA的浓度一般是多少？还有一定要加BSA吗？如果我不加呢？加入BSA的原理又是什么？配制时NaOH和FFA的比例又是多少呢？配制好后为何会出现浑浊？


望哪位高手能帮我解答一下，万分感谢！！
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1楼 2010-05-16 21:54:57
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weihaie

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
您这个问题解决了么? 我拿NaOH配棕榈酸，是溶不了的，应该是先拿乙醇配再加NaOH吗？
最后怎么计算PA的浓度啊？
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巴拉拉小魔仙的魔法棒
5楼2012-03-11 10:21:17
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药道人

荣誉版主 (文坛精英)

净由秽生，明从闇出

优秀版主优秀版主
394210516x(金币+1):谢谢啊 2010-05-21 13:18:43
跟你说，这个是个非常麻烦的实验

不知道你是不是做脂肪肝还是动粥

氮气吹干是为了避免氧化

一定加BSA，而且要加无FFA的BSA


ps：你文献看的太少了
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来时胡涂去时迷，空在人间走这回。未曾生我谁是我，生我之后我是谁？长大成人方知我，合眼朦胧又是谁？不如不来也不去，亦无烦恼亦无悲。
2楼2010-05-21 12:43:00
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药道人

荣誉版主 (文坛精英)

净由秽生，明从闇出

优秀版主优秀版主
394210516x(金币+1):谢谢啊，我是CPU的，我的QQ是423419212，不知道怎么联系你啊 2010-05-21 13:19:37
引用回帖:
Originally posted by 394210516x at 2010-05-16 21:54:57:
各位虫友，你们细胞实验时要用到FFA时，如何进行配制啊？

我在网上查了好多方法，还有一些国内的文献，都说配制前，先用乙醇或石油醚溶解一定质量的脂肪酸，装进一个干净的瓶子中。氮气吹干，然后用0.15M KOH ...

你如果是cpu的，请联系我
赞一下 回复此楼
来时胡涂去时迷，空在人间走这回。未曾生我谁是我，生我之后我是谁？长大成人方知我，合眼朦胧又是谁？不如不来也不去，亦无烦恼亦无悲。
3楼2010-05-21 12:44:34
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0640409

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 药道人 at 2010-05-21 12:44:34:
你如果是cpu的，请联系我

学长有什么好的制作方法吗，我也急用。先谢谢了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-17 19:01:21
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