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julia0708木虫 (正式写手)
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【求助/交流】关于质粒构建与表达的问题 已有12人参与
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本人是化学的，实验室最近申请到了一个生物方面的课题，所以有很多的问题都弄不懂，需要向大家请教一下。先谢过大家了。 按照课题的设想，我们需要先得到一种蛋白，然后在体外做它和一些配体的相互作用。所以现在问题的难点是在蛋白的获得的身上。 目前我们想到的方法是通过构建质粒然后进行表达来获得。 但是在构建的时候又有了一些问题。 大概整理了一下，如下： 首先，我们的蛋白是在人和哺乳动物中存在的蛋白，如果要获得这种蛋白，是不是用最常用的大肠杆菌表达系统无法获得有活性的蛋白？ 其次，我们的目的是为了考察蛋白和配体的结合情况，如果这样的话，是不是只要能够保证其蛋白LBD区域的活性就可以了呢？看到有文献报道在大肠杆菌系统中表达了该蛋白的LBD的部分，这个是不是就可以达到我们的目的呢？这样的蛋白是不是具有活性的蛋白？ 另外，还有个问题想问一下，如果已知蛋白的氨基酸序列，是否可以用序列合成仪来合成蛋白？这样的蛋白能否保证活性呢？和之前通过质粒构建表达的方法相比，两者所需要的成本哪个更高一些？ 很多问题不是很懂，说出来也很混乱，希望大家能帮忙解答下，谢谢大家！ |
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julia0708
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12楼2010-05-14 11:10:46
wordsworth3180
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3楼2010-05-12 20:01:03
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julia0708(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-12 23:21:39
julia0708(金币+5):豁然开朗，非常感谢！ 2010-05-13 11:16:30
julia0708(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-12 23:21:39
julia0708(金币+5):豁然开朗，非常感谢！ 2010-05-13 11:16:30
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简单试着回答 首先，我们的蛋白是在人和哺乳动物中存在的蛋白，如果要获得这种蛋白，是不是用最常用的大肠杆菌表达系统无法获得有活性的蛋白？ 这个不一定，有时候是可以的，有时候得用别的表达系统，如真核表达系统。 其次，我们的目的是为了考察蛋白和配体的结合情况，如果这样的话，是不是只要能够保证其蛋白LBD区域的活性就可以了呢？看到有文献报道在大肠杆菌系统中表达了该蛋白的LBD的部分，这个是不是就可以达到我们的目的呢？这样的蛋白是不是具有活性的蛋白？ LBD不知道什么意思，我理解是结合区域和活性区域，只表达结合区域肯定是没有活性的，但是有结合活性。 另外，还有个问题想问一下，如果已知蛋白的氨基酸序列，是否可以用序列合成仪来合成蛋白？这样的蛋白能否保证活性呢？和之前通过质粒构建表达的方法相比，两者所需要的成本哪个更高一些？ 当然全序列合成价格高，不过现在也在1万左右吧，质粒克隆 表达的话熟手只需要几百块。 |
4楼2010-05-12 21:03:35
julia0708
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5楼2010-05-13 11:18:49
