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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于HRP的使用问题
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dldw2008

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于HRP的使用问题 已有2人参与

如题
大家好，我实验中用到辣根过氧化物酶（HRP),说明书上说它的最佳pH在6.0-6.5，但我实验条件要求在5.5的条件下配制辣根过氧化物酶的溶液，在这种条件下HRP会失活吗？谢谢啦~~
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1楼 2010-05-10 20:27:48
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
不会，靠，还有字数限制
再说，你自己试一下不就知道了么？
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For my life！
2楼2010-05-10 21:23:21
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dldw2008

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-05-10 21:23:21:
不会，靠，还有字数限制
再说，你自己试一下不就知道了么？

这位哥火气不小啊，我外行，不懂，再说哪有什么字数限制？你电脑出问题了吧
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3楼2010-05-10 21:28:21
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
不是啊，我刚开始就打了两个字，系统字数限制，没对你生气，千万莫怪……
自己在溶液里面试一下，简单的很
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For my life！
4楼2010-05-10 21:29:31
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dldw2008

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-05-10 21:29:31:
不是啊，我刚开始就打了两个字，系统字数限制，没对你生气，千万莫怪……
自己在溶液里面试一下，简单的很

我那酶就10mg,说明书上让最好在原装瓶内溶解，如果试了，酶失活啦，那不完了，肯定又被导师批啦~~
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5楼2010-05-10 21:35:41
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
dldw2008(金币+1):谢啦，火气哥~~ 2010-05-10 21:48:41
dldw2008(金币+1): 2010-10-16 09:39:17
这个简单，HRP的酶活高的很，10mg足够你用的，一般的使用浓度都在微克每毫升一下，测酶活都在纳克以下的水平。你按照一般高点的浓度溶解，用最适的buffer，然后用你所需要的buffer大量稀释一下就可以了。纳克级别测活性都嫌多的
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For my life！
6楼2010-05-10 21:38:14
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dldw2008

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2010-05-10 21:38:14:
这个简单，HRP的酶活高的很，10mg足够你用的，一般的使用浓度都在微克每毫升一下，测酶活都在纳克以下的水平。你按照一般高点的浓度溶解，用最适的buffer，然后用你所需要的buffer大量稀释一下就可以了。纳克级别 ...

我买的HRP 酶活度是300 units/mg，这种好像是酶活度最低的，能行吗？
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7楼2010-05-10 21:47:32
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winter_gates

金虫 (正式写手)

生命过客
dldw2008(金币+2):谢谢啦~~ 2010-05-11 08:20:08
dldw2008(金币+2): 2010-10-16 09:39:10
1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量。
酶活力单位：用来表示酶活力大小的单位，通常用酶量来表示。
其中一个称酶活力国际单位，规定为：在特定条件下，1分钟内转化1微摩尔底物，或者底物中1微摩尔有关基团所需的酶量，称为一个国际单位（IU，又称U）。
另外一个国际酶学会议规定的酶活力单位是Kat，规定为：在最适条件下，1秒钟能使1摩尔底物转化的酶量。
Kat和U的换算关系：1 Kat=6×107U， 1U=16067n Kat
酶的比活力（specific activity）：是指每毫克质量的蛋白质中所含的某种酶的催化活力。是用来度量酶纯度的指标。是生产和酶学研究中经常使用的基本数据。

恩，上面就是些基本概念了。该酶的比活是相当的高，很容易测的。如果你不放心，可以先梯度试一下，呵呵。
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For my life！
8楼2010-05-10 22:08:56
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