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【求助/交流】ITS测序
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xclj369ouc
金虫
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注册: 2007-11-27
专业: 分子与进化生态学
[交流]
【求助/交流】ITS测序
已有13人参与
请教大家谁有测过ITS序列?
是直接PCR产物测序的,还是克隆测序的啊?
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1楼
2010-05-09 12:11:09
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王忆楠yn
新虫
(小有名气)
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虫号: 3460539
注册: 2014-10-08
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼
:
Originally posted by
冼亮淀粉酶
at 2010-05-09 16:35:39
ITS不长,只要双向各一个反应就测出来了,每个反应的开头都不绝对准,尾部准,拼接之后得到准确的序列。相反,克隆过程中可能出错,可信度不高的,投稿的时候会被评阅人问的。
求大神!我扩its序列有条带,但是测不出序列,这样会不会是因为模板DNA裂解掉了,扩cytb也是没有条带,模板放冰箱一年了。。。
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17楼
2015-05-15 13:09:28
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冼亮淀粉酶
专家顾问
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生物大分子降解酶
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金币: 19284.6
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在线: 2766.2小时
虫号: 856414
注册: 2009-09-25
性别: GG
专业: 环境微生物学
管辖:
微生物
★ ★ ★
小木虫(金币
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):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2):招版主! 2010-05-09 13:34:26
我PCR产物不纯化就送去测序,测过超过20条序列。不过最好不要有干扰测序公司纯化的杂带,量也要达到他们的要求。
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(2人)
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流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼
2010-05-09 13:17:17
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nklyw
木虫
(正式写手)
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散金: 28
红花: 1
帖子: 645
在线: 66.4小时
虫号: 843751
注册: 2009-09-08
专业: 病原细菌与放线菌生物学
两者都行吧 不过送测之前要纯化的
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3楼
2010-05-09 13:23:57
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long5lizi
新虫
(初入文坛)
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帖子: 42
在线: 9.2小时
虫号: 925650
注册: 2009-12-11
专业: 微生物生理与生物化学
★ ★ ★
小木虫(金币
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1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-05-09 17:33:28
我们一般是PCR以后再去测序的。
无论是哪种方法得到的序列,在自动测序仪上都具有测序引物与模板的识别、结合过程,使得靠近引物端的碱基测序信号弱,不易读出。对于克隆测序,读不出的是部分载体序列,而直接测序读不出的是ITS片段的部分序列,所以前者所得序列的更符合ITS全长。
但直接测序要快速方便,而克隆测序费时费力
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(2人)
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4楼
2010-05-09 14:41:41
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