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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR扩增怎么就没有条带！
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增怎么就没有条带！ 已有17人参与

我想请问一下，我最近做PCR反应的时候怎么就没有目的基因片段产物？？？
是不是以下条件出问题了？

1）退火温度
2）引物浓度
3）模板浓度
4）dNTP浓度
5）Taq PlusI 聚合酶浓度
6）10X PCR buffer.

dNTP、Taq Plus聚合酶、10X PCR buffer 都是新的，剩下第一和第二的因素，
我想请问的是我一直P不出条带出来，是不是引物或者模板的问题？？
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1楼 2010-05-08 14:26:09
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小白兄

金虫 (小有名气)
做什么PCR？大小多少？GC含量怎么样？引物设计匹配度怎么样？关系到退火温度和延伸时间。个人觉得可以尝试梯度退火尝试下。如果再不出来，就要考虑引物的问题，是设计不合理还是引物合成有问题。欢迎继续交流
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时光如流水，匆匆而过。
14楼2010-05-16 12:34:02
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keeperw

捐助贵宾 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很有可能是引物的原因，最主要两条：3’端特异性要有保证；退火温度要一致
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2楼2010-05-08 14:51:14
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todouhy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
再次检查一下自己的引物是否设计合理，各个组分的浓度！
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-05-08 14:56:54
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
p不出来，一般就是引物问题，引物之前如果没有做过，那一般就是引物问题。但是模板也不容忽视，模板质量和浓度也要注意
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-05-08 15:03:01
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