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hall1998

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助】硅纳米粒子洗涤及连接 已有3人参与

各位大家好。我最近用反相微乳(油包水)制备了直径在30-40nm的二氧化硅纳米粒子,TEM显示是球形的。但是,最近发现了一个问题,就是在用丙酮破乳后,再用乙醇第一次洗涤的时候,离心后发现沉淀由白色变成了透明的,但是一超声后,由变成白色悬浮液,请问这是怎么回事啊??
再一问题就是,二氧化硅纳米粒子(合成同上法,表面氨基修饰)与DNA的连接问题,我用的是EDC/NHS连接氨基修饰的DNA。做法如下:首先氨基修饰的NP悬浮在含有10%琥珀酸酐的DMF中,以使NP氨基转化为羧基,离心洗涤后,用加入EDC/NHS,以及氨基DNA连接反应3h。PS:EDC、NHS是新买的,DNA合成了2次。但是就是连不上。都连了几个月了。请各位一定要帮帮我啊。
谢谢大家!
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hall1998

木虫 (小有名气)

补充一点,这些个透明的沉淀,在遇到水之后,即使没有进行超声处理,就会变白。
4楼2010-04-29 10:46:17
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refnew

专家顾问 (知名作家)


hall1998(金币+1): 2010-04-29 10:30
就是在用丙酮破乳后,再用乙醇第一次洗涤的时候,离心后发现沉淀由白色变成了透明的。

从来没出现过这个问题,可能配方不对。
怀疑是氨基没修饰上。
2楼2010-04-29 10:08:25
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hall1998

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by refnew at 2010-04-29 10:08:25:
从来没出现过这个问题,可能配方不对。
怀疑是氨基没修饰上。

NP氨基含量用荧光胺进行了测定,有很强的荧光出现。在用琥珀酸酐处理后,再用荧光胺进行了测定,这个时候,几乎没有荧光出现。

配方是:环己烷 7.5ml,正己醇 1.8ml,TX-100 1.77ml,20min后,加入水相480ul(水400ul+80ul 水溶性染料)反应30min后,再加入100ul TEOS,60ul 氨水,反应24h后,加入TEOS 50ul,APTES 20ul 反应24。 用丙酮破乳后(沉淀是白色),沉淀用无水乙醇洗涤(离心后的沉淀是透明),用水洗涤,(悬浮液放置一段时间后再离心,此时的沉淀有可能变成白色)。
在进行DNA连接时,会用到乙醇处理,所以每次处理后,都变成了透明的沉淀。

另外,DNA与NP连接,各位有好的经验和技巧的,请给予指点,小弟我在这个问题已经折腾了快一年了。求各位了!!!!!!
3楼2010-04-29 10:30:11
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refnew

专家顾问 (知名作家)


氨水体系做出来的二氧化硅没法对氨基进行定量,氨水不可能洗干净。

你的配方水的用量很少,TEOS和APTES用了那么多。
丙酮破乳后,应该是白色的悬浮液,离心后是白色沉淀。
加入乙醇重新分散,成乳白色,再离心后是白色沉淀。乙醇和二氧化硅的折射率差别还是很大的。
你加了染料,应该不是白色的了。
5楼2010-04-29 10:47:41
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