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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hare1212

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】De novo 测序 已有2人参与

请问各位大侠，蛋白质的De novo 测序只能测到该蛋白酶解后的1~3个肽段的氨基酸序列，如果我想克隆这个蛋白的全序列基因，我该如何做呢？我做的是细菌的分泌蛋白。是不是需要建这个细菌的文库，然后用southern 杂交的方法调出该蛋白的基因呢？还是有更简便的方法呢？请教大家啦，十分感谢！
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1楼 2010-04-27 21:40:31
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1110rainjob

铜虫 (小有名气)
★ ★
hare1212(金币+1): 2010-04-27 22:22
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-27 22:43
scelab:你可以点升级了，看右上角的“升级” 2010-04-27 22:43
1、 可以考虑利用你的1~3个肽段的氨基酸序列与已发布的蛋白质序列进行比对，看是否能找到相似的同源蛋白，如果可以找到那么你可以查找这类蛋白的保守序列或相应的核苷酸的保守序列设计引物进行PCR获得目的基因。
2、如果数据库中找不到，那么你可以利用你现有的1~3个肽段的氨基酸序列，设计简并引物，采用RACE技术先获得mRNA，然后再从基因组中调出全长基因。
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2楼2010-04-27 22:11:57
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hare1212

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 1110rainjob at 2010-04-27 22:11:57:
1、 可以考虑利用你的1~3个肽段的氨基酸序列与已发布的蛋白质序列进行比对，看是否能找到相似的同源蛋白，如果可以找到那么你可以查找这类蛋白的保守序列或相应的核苷酸的保守序列设计引物进行PCR获得目的基因。
...

我想请问大侠，我是原核生物表达的蛋白质，能否用RACE的方法获得目标全长基因呢？
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3楼2010-04-28 20:31:52
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