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jingcong198203

铜虫 (初入文坛)

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虫号: 536201
注册: 2008-03-30
性别: MM
专业: 分析化学

[交流] 【求助】氨基酸含量测定已有13人参与

大家好，有个问题向大家请教，我在测定蛋白中的氨基酸含量，我查了查有好四种柱前衍生方法，分别为异硫氰酸苯酯（PITC）法、6-氨基喹啉－N－羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）法、邻苯二醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC）法、2，4-二硝基氟苯（DNFB）法，我不清楚每种衍生方法的适用范围，所以不知道该选择哪一种衍生试剂？我的氨基酸有甘氨酸，丙氨酸，赖氨酸，谷氨酸，苯丙氨酸，谢谢啦！

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1楼2010-04-23 15:57:15

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ywxkjjh

金虫 (初入文坛)

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虫号: 1103793
注册: 2010-09-20
专业: 色谱分析

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

9楼: Originally posted by azcaban at 2012-01-04 10:31:55:
可以用PITC法。。。操作简单，检出限低，我曾经做过检测限达到0.5ng级的。，线性很好，范围也很广，达到4个9。而且对于一二级氨基酸都可以反应。你上面提到的这几种氨基酸都可以和PITC反应。

你好，你做过甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺的PITC衍生化吗？

我做的甘氨酸衍生物有个肩峰，谷氨酰胺衍生物有两个峰。

色谱条件为：
柱子：Agilent SB-Aq 250mm*4.6mm, 5um
流动相A：50mM NaAC (pH=6.5)
流动相B：50mM NaAC (pH=6.5):ACN=1:1
Time:0-10-25-40min
B%:5%-5%-95%-95%
进样量10uL

请指教，谢谢！