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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】紧急求助 已有4人参与

我这几天在提取拟南芥的基因组dna,用异丙醇后可以看到有沉淀,但当用琼脂糖电泳检测的时候总看不到条带,不知道是什么原因,请大家指导指导
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

我用的是ctab法提取的,步骤是:1,液氮研磨,加入ctab和巯基乙醇,2,65度加热90分钟,3,加入等体积酚/ 氯仿(1:1)摇匀,8000rpm离心2分钟,4, 吸取上清,转移到一新离心管中,加入两倍体积的无水乙醇和乙酸钠,零下20度放一小时,5, 12000离心10分钟,这时候可以看到白色沉淀(但不知道是不是dna),而后用酒精洗涤,6, 加无菌水溶解。而后勇琼脂糖凝胶电泳检查,看不到条带,以前提的时候是可以看到的,只是这次题的看不到,自己还没找到时什么原因,还有,就是那个酚是不是用tris-酚?实验室已经配好的酚已经变成红色,好像已经氧化了
5楼2010-04-19 13:15:53
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

liaoyh(金币+1): 2010-04-19 12:56
什么状态的沉淀,DNA感觉是有点纤维状的,成团,如果是絮状,粉末状,基本不是降解了,就是都是蛋白质。
感觉问题不是在抽提步骤,就是裂解步骤
2楼2010-04-19 11:44:42
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

估计沉淀的是蛋白质,可能是你提取的DNA量太少了吧,拟南芥基因组还是挺好提取的;要不就用试剂盒吧,
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-04-19 11:49:18
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qdeev

金虫 (正式写手)

琼脂糖还是挺灵敏的。。。只要有微量的就能看出来,而且你这给的条件也太模糊了。。
4楼2010-04-19 12:20:58
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