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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】紧急求助
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】紧急求助 已有4人参与

我这几天在提取拟南芥的基因组dna，用异丙醇后可以看到有沉淀，但当用琼脂糖电泳检测的时候总看不到条带，不知道是什么原因，请大家指导指导
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1楼 2010-04-19 11:40:46
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
liaoyh(金币+1): 2010-04-19 12:56
什么状态的沉淀，DNA感觉是有点纤维状的，成团，如果是絮状，粉末状，基本不是降解了，就是都是蛋白质。
感觉问题不是在抽提步骤，就是裂解步骤
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2楼2010-04-19 11:44:42
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
估计沉淀的是蛋白质，可能是你提取的DNA量太少了吧，拟南芥基因组还是挺好提取的；要不就用试剂盒吧，
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-04-19 11:49:18
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qdeev

金虫 (正式写手)
琼脂糖还是挺灵敏的。。。只要有微量的就能看出来，而且你这给的条件也太模糊了。。
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4楼2010-04-19 12:20:58
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
我用的是ctab法提取的，步骤是：1，液氮研磨，加入ctab和巯基乙醇，2，65度加热90分钟，3，加入等体积酚/ 氯仿（1:1）摇匀，8000rpm离心2分钟，4， 吸取上清，转移到一新离心管中，加入两倍体积的无水乙醇和乙酸钠，零下20度放一小时，5， 12000离心10分钟，这时候可以看到白色沉淀(但不知道是不是dna)，而后用酒精洗涤，6， 加无菌水溶解。而后勇琼脂糖凝胶电泳检查，看不到条带，以前提的时候是可以看到的，只是这次题的看不到，自己还没找到时什么原因，还有，就是那个酚是不是用tris-酚？实验室已经配好的酚已经变成红色，好像已经氧化了
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5楼2010-04-19 13:15:53
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