24小时热门版块排行榜    

查看: 1157  |  回复: 12
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】关于连接转化 已有7人参与

请问连接转化,热击转化大肠和电转阳性菌,总是得不到转化子。
在连接转化方面,有什么经验,请教教我吧!多谢谢了
使用SalI和Nhe I 双酶切,质粒是约6800,目的片段约700.使用宝生物的solutionⅠ连接

[ Last edited by 塞外雨 on 2010-4-19 at 09:07 ]
回复此楼
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-04-19 11:55:36:
同意连接出了问题:
1,首先分析会不会双酶切有切不开的,引物上酶切位点的的保护碱基够不够
2,连接时一般要求质粒:片段>3

我是连到T载体之后再双酶切回收的,双酶切没有问题。
谢谢!
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
8楼2010-04-19 12:17:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

yujiaping1

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
具体说说你用的什么载体,多大的片段,如何酶切连接的
2楼2010-04-18 17:55:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个实在没什么好说的,仔仔细细地阅读protocol,记得我手把手教别人做大肠杆菌转化,最后我做出来了,她却没做出来,咋办,究其原因就是看的不仔细,
3楼2010-04-18 23:05:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 塞外雨 at 2010-04-18 17:20:12:
请问连接转化,热击转化大肠和电转阳性菌,总是得不到转化子。
在连接转化方面,有什么经验,请教教我吧!多谢谢了
使用SalI和Nhe I 双酶切,质粒是约6800,目的片段约700.使用宝生物的solutionⅠ连接

[ La ...

很可能就是链接出了问题。多优化条件吧。
你的感受态一般都没有问题的。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2010-04-19 11:41:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我面上完蛋了 +5 且听虎啸 2026-08-20 5/250 2026-08-21 09:48 by climap
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +8 yuleib84 2026-08-19 9/450 2026-08-21 09:45 by climap
[基金申请] 让我中一个面上吧! +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见