应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒连接问题
51/1返回列表
查看: 673  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate

[交流] 【求助/交流】质粒连接问题 已有4人参与

求大大们：质粒连接的原理是什么啊？如果需要内切酶切开DNA，切开质粒的还好理解，但是要把目的片段的切开，再连接到质粒上，就不好理解了。那样岂不是把目的片段破坏了？还怎么测序什么的啊？而且，连接上目的片段的质粒也不能回复为环状，怎么进入到感受态细胞呢？
PS：我转化好的产物因为有多余，所以放在4度保存，大概3天了，会不会失效呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
不忘初心，为梦远行。
1楼 2010-04-17 11:47:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
引用回帖:
Originally posted by lstt09nk at 2010-04-17 19:10:25:



推荐你使用引物设计软件或者用DNAMAN，里面能查找出目的片段内的酶切位点和未酶切位点，这样引物设计起来就方便多了~~

哦了！太感谢了！
回复此楼
不忘初心，为梦远行。
7楼2010-04-18 10:15:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lstt09nk

铁杆木虫 (职业作家)

小堂
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-17 13:31
目的片段经PCR后两端已经连接上酶切位点的，所以酶切但时候切的是两端，不会破坏片段本身，目的片段和质粒的链接也是通过酶切位点的粘性末端链接的，会成环状的
放在4度3天应该还能用，但是建议放在-20，如果长期不用的话~
赞一下(2人) 回复此楼
坚持能无数次改变人生的风景，因为只要路是对的，就不怕远~~~
2楼2010-04-17 12:21:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
引用回帖:
Originally posted by lstt09nk at 2010-04-17 12:21:02:
目的片段经PCR后两端已经连接上酶切位点的，所以酶切但时候切的是两端，不会破坏片段本身，目的片段和质粒的链接也是通过酶切位点的粘性末端链接的，会成环状的
放在4度3天应该还能用，但是建议放在-20，如果长期 ...

多谢！不过，目的片段是怎么通过PCR连上酶切位点的？它的两端不是引物吗？这么巧合每对引物都会有粘性末端吗？
赞一下 回复此楼
不忘初心，为梦远行。
3楼2010-04-17 16:33:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

entomology557

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-17 18:13
lstt09nk(金币+2): 2010-04-17 19:06
引用回帖:
Originally posted by leon198418029 at 2010-04-17 16:33:02:


多谢！不过，目的片段是怎么通过PCR连上酶切位点的？它的两端不是引物吗？这么巧合每对引物都会有粘性末端吗？

一般设计引物的时候就需要考虑加上酶切位点，需要注意的是目的片段内部不能还有同样的酶切位点，不然就乱切了
赞一下(3人) 回复此楼
生物进化基本常识：一定范围内，选择压力越大，要么进化的越快来适应这种压力，或者直接被淘汰。
4楼2010-04-17 17:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭