应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教XhoI与EcoRI双酶切问题
51/1返回列表
查看: 1465  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 yusuya 的 1 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yusuya

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教XhoI与EcoRI双酶切问题 已有6人参与

本人用pDsRed-Monomer-C1质粒用XhoI与EcoRI双酶切后，想连接一段目的基因，可是总是连接不上，而且一直是自连，CAGATC‘TCGA’GCTCAAGCTTCG‘AATT’CT
                                                            GTCTAG‘AGCT’CGAGTTCGAAGC‘TTAA’GA
                                                                         XhoI                             EcoRI   
希望高人指点下都什么原因会造成自连呢？两个酶切的位点很近是不是会造成影响呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-04-15 14:39:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
yusuya(金币+1): 2010-04-15 21:24
先单酶切看看，看是否效率一样，确定两个酶都没有问题。如果两个酶都确定了没问题就用热敏磷酸酶做一下去磷酸化，这样起码能减少自连的情况发生几率。连接的时候做一下自连的做对照，确认是否真的是自连了。其他的暂时没想到。
赞一下 回复此楼
3楼2010-04-15 17:10:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

genewind

金虫 (小有名气)
yusuya(金币+1): 2010-04-15 21:24
双酶切效率会低点，你可以试试按顺序一个酶切后沉淀纯化后再用另一个酶切，一般1ug的DNA用5个U的酶。
赞一下 回复此楼
2楼2010-04-15 15:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨中蜗牛

金虫 (正式写手)
你要接的目的片段是不是没有黏性末端啊
pcr是不是延伸完就拿出来了，没有经过4度20分钟啊？
这样的话就不好接
赞一下 回复此楼
■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾
4楼2010-04-15 17:32:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小白3521

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 雨中蜗牛 at 2010-04-15 17:32:15:
你要接的目的片段是不是没有黏性末端啊
pcr是不是延伸完就拿出来了，没有经过4度20分钟啊？
这样的话就不好接

这是什么原理啊
回复此楼
5楼2010-04-15 19:09:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 293求调剂 +12 zjl的号 2026-03-16 17/850 2026-03-22 16:51 by i_cooler
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 354求调剂 +7 Tyoumou 2026-03-18 10/500 2026-03-22 11:11 by 人来盛
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 070300化学319求调剂 +7 锦鲤0909 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:46 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭