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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】westernbloy问题
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 liyong1981 的 1 个金币

liyong1981

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】westernbloy问题 已有6人参与

如题

我马上要做两个蛋白一个大概90K，一个大概38K，我想一般SDS胶跑，请问高手，分离胶和积层胶浓度大概用多大的？还有，我转印 的时候能在一张膜上么？多长时间呢？谢谢
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1楼 2010-04-15 09:07:50
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antibody01

金虫 (著名写手)
★ ★
liyong1981(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-15 11:53
我通常用4-20的梯度胶做分离胶，转印可以在一张膜上的。
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生活就像强奸，无法反抗就要学会享受； 工作就像轮奸，你不行就要别人上； 社会就像自慰，一切都要靠自己的双手解决。
2楼2010-04-15 09:39:03
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主
★ ★
liyong1981(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-15 11:53
浓度影响不大，能分开的，

一张膜也没问题，选择相同的一抗来源就行
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3楼2010-04-15 10:00:25
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liyong1981

金虫 (正式写手)
分离胶不是有个线性范围么？大概哟哦那个多大呢？我上次用的6%的胶，SDS跑的MARKER都很不好
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4楼2010-04-15 10:45:29
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Aileenwarner

铁虫 (初入文坛)
★ ★
liyong1981(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-15 11:54
我跑过20~80KD的全蛋白，用12.5%分离胶，4.5%浓缩胶，效果不错，低分子量MARKER跑得也很好，供你参考。
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5楼2010-04-15 10:59:37
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做的时候，用12%的分离胶，5%浓缩胶，MARKER跑的很好，低分子量高分子亮的都不错，你可以参考，转膜转到一张上面没有问题。
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6楼2010-04-15 12:52:52
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liyong1981

金虫 (正式写手)
谢谢大家，再有我想知道，有没有做过抗体库的朋友，是这样的，我现在设计了个模板，想在TG1和HB2151中表达，如果能表达我的SCFV，我就可以下一步设计随机引物了，我的问题是，我不用M13噬菌体超感染，只用IPTG诱导，SDS裂解，westernblot能看出来么？
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7楼2010-04-15 13:18:55
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liyong1981

金虫 (正式写手)
补充一下，我用的载体是pCANTAB5,求高手解答
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8楼2010-04-15 13:27:19
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liyong1981

金虫 (正式写手)
求高手解答
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9楼2010-04-15 13:44:48
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
★
liyong1981(金币+1):谢谢参与
12%分离胶  4%浓缩胶完全可以满足了。
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梦在路就在！
10楼2010-04-15 13:46:37
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