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liyong1981

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】westernbloy问题 已有6人参与

如题

我马上要做两个蛋白一个大概90K,一个大概38K,我想一般SDS胶跑,请问高手,分离胶和积层胶浓度大概用多大的?还有,我转印 的时候能在一张膜上么?多长时间呢?谢谢
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liyong1981

金虫 (正式写手)


谢谢大家,再有我想知道,有没有做过抗体库的朋友,是这样的,我现在设计了个模板,想在TG1和HB2151中表达,如果能表达我的SCFV,我就可以下一步设计随机引物了,我的问题是,我不用M13噬菌体超感染,只用IPTG诱导,SDS裂解,westernblot能看出来么?
7楼2010-04-15 13:18:55
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antibody01

金虫 (著名写手)

★ ★
liyong1981(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-15 11:53
我通常用4-20的梯度胶做分离胶,转印可以在一张膜上的。
生活就像强奸,无法反抗就要学会享受; 工作就像轮奸,你不行就要别人上; 社会就像自慰,一切都要靠自己的双手解决。
2楼2010-04-15 09:39:03
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silicare

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★ ★
liyong1981(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-15 11:53
浓度影响不大,能分开的,

一张膜也没问题,选择相同的一抗来源就行
3楼2010-04-15 10:00:25
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liyong1981

金虫 (正式写手)


分离胶不是有个线性范围么?大概哟哦那个多大呢?我上次用的6%的胶,SDS跑的MARKER都很不好
4楼2010-04-15 10:45:29
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