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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】westernbloy问题
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liyong1981

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】westernbloy问题 已有6人参与

如题

我马上要做两个蛋白一个大概90K，一个大概38K，我想一般SDS胶跑，请问高手，分离胶和积层胶浓度大概用多大的？还有，我转印 的时候能在一张膜上么？多长时间呢？谢谢
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1楼 2010-04-15 09:07:50
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liyong1981

金虫 (正式写手)
谢谢大家，再有我想知道，有没有做过抗体库的朋友，是这样的，我现在设计了个模板，想在TG1和HB2151中表达，如果能表达我的SCFV，我就可以下一步设计随机引物了，我的问题是，我不用M13噬菌体超感染，只用IPTG诱导，SDS裂解，westernblot能看出来么？
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7楼2010-04-15 13:18:55
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antibody01

金虫 (著名写手)
★ ★
liyong1981(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-15 11:53
我通常用4-20的梯度胶做分离胶，转印可以在一张膜上的。
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生活就像强奸，无法反抗就要学会享受； 工作就像轮奸，你不行就要别人上； 社会就像自慰，一切都要靠自己的双手解决。
2楼2010-04-15 09:39:03
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★ ★
liyong1981(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-15 11:53
浓度影响不大，能分开的，

一张膜也没问题，选择相同的一抗来源就行
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-04-15 10:00:25
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liyong1981

金虫 (正式写手)
分离胶不是有个线性范围么？大概哟哦那个多大呢？我上次用的6%的胶，SDS跑的MARKER都很不好
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4楼2010-04-15 10:45:29
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