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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr产物变大
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 still2008 的 43 个金币

still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者

[交流] 【求助/交流】pcr产物变大 已有4人参与

问题是这样的：
首先用MboI酶酶切基因组DNA，产生300-1000bp大小的片段，再接上MboI接头，然后用单链的接头引物对连接产物进行扩增，1%琼脂糖凝胶检测发现产生了很长一段>1000bp的片段，而且亮度还比较亮，按说扩增产物也应在300-1000bp左右。请大家说说自己的看法，谢谢！
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有时一本正经，有时胡言乱语。
1楼 2010-04-13 17:08:28
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allengrass

新虫 (初入文坛)
still2008(金币+1): 2010-04-15 10:33
still2008(金币+1):从琼脂糖凝胶检测的情况看，应该切全了，DNA浓度为100ng/ul，体系20ul DNA，10U/ul酶 1ul,酶切时间3.5h 2010-04-15 10:36
我估计是酶切不完全。酶切完后的产物应该跑下电泳检查一下。
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2楼2010-04-13 18:38:35
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j2

木虫 (正式写手)
still2008(金币+2):接头的一端不能识别酶切位点的，也能接上么？ 2010-04-15 10:39
难道接接头的同时有2段基因也连起来了？？？
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2010-04-14 13:06:20
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liyong1981

金虫 (正式写手)
still2008(金币+2):也有可能 2010-04-15 10:40
非特异扩增？？
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4楼2010-04-14 14:23:03
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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者
引用回帖:
Originally posted by allengrass at 2010-04-13 18:38:35:
我估计是酶切不完全。酶切完后的产物应该跑下电泳检查一下。

从琼脂糖凝胶检测的情况看，应该切全了，DNA浓度为100ng/ul，体系20ul DNA，10U/ul酶 1ul,酶切时间3.5h
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有时一本正经，有时胡言乱语。
5楼2010-04-15 10:37:32
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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者
引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2010-04-14 14:23:03:
非特异扩增？？

如果是非特性扩增的话，模板DNA是哪来的？模板中的DNA只有1000bp以下的，没1000bp以上的片段。
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有时一本正经，有时胡言乱语。
6楼2010-04-15 10:43:46
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liyong1981

金虫 (正式写手)
still2008(金币+1):。。。。。。 2010-04-15 11:09
你用水试试，有时候很多人也能扩增出来带的，
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7楼2010-04-15 10:46:56
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