【求助/交流】做过原核表达的高手请进！！！ - 分子生物 - 综合其他

11楼2010-04-13 13:31:16

whtz001

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换个菌种试一试

12楼2010-04-13 13:38:52

w.king124

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引用回帖:

Originally posted by whtz001 at 2010-04-13 13:38:52:
换个菌种试一试

Rosetta和BL21都用了，再换哪个呢？请指教，谢谢

13楼2010-04-13 13:48:00

liyong1981

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w.king124(金币+1):谢谢你 2010-04-13 17:13
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-14 00:13

1.蛋白较大，建议做WESTBLOT，PET系统的组氨酸标签很容易鉴别和纯化。SDS胶很难看得见
2.30度诱导
3.如果BL21本身没问题，那就不要换了，这个菌株是和PET经典的搭配
4.也有可能是你的阅读框变了，这也很正常，你做表达也不就是验证蛋白表达与否么

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14楼2010-04-13 14:39:02

panda73

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scelab(金币+3):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-14 00:14

你确定菌株是BL21(DE3)吗？如果是BL21,pET系列质粒是不能表达的。

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15楼2010-04-13 17:01:15

muchong5577

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请问你是怎么检测蛋白的？确认是包涵体还是可溶性表达了吗？

16楼2010-04-13 17:12:45

w.king124

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引用回帖:

Originally posted by liyong1981 at 2010-04-13 14:39:02:
1.蛋白较大，建议做WESTBLOT，PET系统的组氨酸标签很容易鉴别和纯化。SDS胶很难看得见
2.30度诱导
3.如果BL21本身没问题，那就不要换了，这个菌株是和PET经典的搭配
4.也有可能是你的阅读框变了，这也很正常， ...

现在关键是没有这个蛋白的一抗啊，买也买不到的

17楼2010-04-13 17:15:05