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w.king124

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】做过原核表达的高手请进!!! 已有10人参与

轮状病毒VP7基因连到pET32a上,在BL21中诱导表达,没有出结果,怎么办呀,急死了
我该换载体还是菌株呢?大家有做过的推荐一下啊,谢谢了
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liyong1981

金虫 (正式写手)


★ ★
w.king124(金币+1):谢谢你 2010-04-13 17:13
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-14 00:13
1.蛋白较大,建议做WESTBLOT,PET系统的组氨酸标签很容易鉴别和纯化。SDS胶很难看得见
2.30度诱导
3.如果BL21本身没问题,那就不要换了,这个菌株是和PET经典的搭配
4.也有可能是你的阅读框变了,这也很正常,你做表达也不就是验证蛋白表达与否么
14楼2010-04-13 14:39:02
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summer0922

铁杆木虫 (正式写手)

你再说的详细点,多少度诱导的?诱导时间和IPTG浓度?
2楼2010-04-13 09:17:40
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竹林细雨

金虫 (著名写手)

★ ★
w.king124(金币+1): 2010-04-13 11:08
amisking(金币+2): 2010-04-13 12:57
首先测序正确么?
其次诱导条件(温度,IPTG浓度,诱导时间)
再次换个菌种,我曾经遇到过BL21不表达其他菌种就可以!

祝你好运!
3楼2010-04-13 09:46:51
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w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by summer0922 at 2010-04-13 09:17:40:
你再说的详细点,多少度诱导的?诱导时间和IPTG浓度?

你好,我是37度,IPTG1mM诱导了五个小时
4楼2010-04-13 10:17:51
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