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汕头大学海洋科学接受调剂
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w.king124

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】做过原核表达的高手请进!!! 已有10人参与

轮状病毒VP7基因连到pET32a上,在BL21中诱导表达,没有出结果,怎么办呀,急死了
我该换载体还是菌株呢?大家有做过的推荐一下啊,谢谢了
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308145157

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-13 13:24
w.king124(金币+1):谢谢你的建议 2010-04-13 13:27
你可以查看下pETmanual,上面关于pET系列的问题大多都有,这个文件可以在Google上搜索下载。
重点看下N端原则,可以解释部分蛋白质检测不到表达的原因。
另外建议你做下western检测,看看是否蛋白表达量过低。
还有IPTG浓度可以做个梯度,我最高用过8mM的。
心若在,梦就在......
9楼2010-04-13 13:11:02
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summer0922

铁杆木虫 (正式写手)

你再说的详细点,多少度诱导的?诱导时间和IPTG浓度?
2楼2010-04-13 09:17:40
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竹林细雨

金虫 (著名写手)

★ ★
w.king124(金币+1): 2010-04-13 11:08
amisking(金币+2): 2010-04-13 12:57
首先测序正确么?
其次诱导条件(温度,IPTG浓度,诱导时间)
再次换个菌种,我曾经遇到过BL21不表达其他菌种就可以!

祝你好运!
3楼2010-04-13 09:46:51
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w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by summer0922 at 2010-04-13 09:17:40:
你再说的详细点,多少度诱导的?诱导时间和IPTG浓度?

你好,我是37度,IPTG1mM诱导了五个小时
4楼2010-04-13 10:17:51
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