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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做过原核表达的高手请进！！！
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w.king124

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】做过原核表达的高手请进！！！ 已有10人参与

轮状病毒VP7基因连到pET32a上，在BL21中诱导表达，没有出结果，怎么办呀，急死了
我该换载体还是菌株呢？大家有做过的推荐一下啊，谢谢了
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1楼 2010-04-13 08:51:45
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308145157

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-13 13:24
w.king124(金币+1):谢谢你的建议 2010-04-13 13:27
你可以查看下pETmanual，上面关于pET系列的问题大多都有，这个文件可以在Google上搜索下载。
重点看下N端原则，可以解释部分蛋白质检测不到表达的原因。
另外建议你做下western检测，看看是否蛋白表达量过低。
还有IPTG浓度可以做个梯度，我最高用过8mM的。
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心若在，梦就在......
9楼2010-04-13 13:11:02
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summer0922

铁杆木虫 (正式写手)
你再说的详细点，多少度诱导的？诱导时间和IPTG浓度？
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2楼2010-04-13 09:17:40
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竹林细雨

金虫 (著名写手)
★ ★
w.king124(金币+1): 2010-04-13 11:08
amisking(金币+2): 2010-04-13 12:57
首先测序正确么？
其次诱导条件（温度，IPTG浓度，诱导时间）
再次换个菌种，我曾经遇到过BL21不表达其他菌种就可以！

祝你好运！
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3楼2010-04-13 09:46:51
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by summer0922 at 2010-04-13 09:17:40:
你再说的详细点，多少度诱导的？诱导时间和IPTG浓度？

你好，我是37度，IPTG1mM诱导了五个小时
赞一下 回复此楼
4楼2010-04-13 10:17:51
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