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w.king124

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】做过原核表达的高手请进！！！ 已有10人参与

轮状病毒VP7基因连到pET32a上，在BL21中诱导表达，没有出结果，怎么办呀，急死了
我该换载体还是菌株呢？大家有做过的推荐一下啊，谢谢了
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1楼 2010-04-13 08:51:45
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-04-13 12:43:00:
测序结果出来后一定要比对整个阅读框，从T7启动子区开始到终止密码子地方。
对该基因进行稀有密码子分析，看是否存在大量串联的稀有密码子出现，大量出现也会影响表达。如果是建议更换Rosetta系列菌株。
是否为 ...

其实我最先做的就是在Rosetta菌株中诱导表达，SDS-PAGE电泳检测（现在也只有着一种方法可行），没有结果，之后我才在BL21中诱导的。
是不是表达的蛋白有点大呢？我的蛋白是326aa
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8楼2010-04-13 13:05:42
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summer0922

铁杆木虫 (正式写手)
你再说的详细点，多少度诱导的？诱导时间和IPTG浓度？
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2楼2010-04-13 09:17:40
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竹林细雨

金虫 (著名写手)
★ ★
w.king124(金币+1): 2010-04-13 11:08
amisking(金币+2): 2010-04-13 12:57
首先测序正确么？
其次诱导条件（温度，IPTG浓度，诱导时间）
再次换个菌种，我曾经遇到过BL21不表达其他菌种就可以！

祝你好运！
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3楼2010-04-13 09:46:51
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by summer0922 at 2010-04-13 09:17:40:
你再说的详细点，多少度诱导的？诱导时间和IPTG浓度？

你好，我是37度，IPTG1mM诱导了五个小时
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4楼2010-04-13 10:17:51
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