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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么我跑SDS-PAGE这么诡异，求大侠们帮帮忙啊！！！！
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rivergf

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】为什么我跑SDS-PAGE这么诡异，求大侠们帮帮忙啊！！！！ 已有7人参与

昨天我跑了一个SDS-PAGE，但配制的12%的分离胶上层界面是呈锯齿状的，这是为什么啊？？？？

最后我还是用这样的胶跑了电泳，今天终于脱完色，结果整块胶上的条到都压缩到又半侧，左半侧没有任何的条带！

因为是第一次跑SDS-PAGE，一位师兄说，不管是浓缩胶还是分离胶，把电压设置成100V/H，就不用管了！因此开始跑电泳以后，我就去吃饭了，过了一个半小时，再去看的时候发现溴酚蓝前沿都已经到了底部，于是关了电源，取下凝胶。

因为前天倒了两块板，今天上午一位师姐用另一块凝胶跑了一板，电压也设置成100V/H，她的条带还行，至少各条带都跑出来了。而且条带都是直的，条带的宽度也很正常，不想我的那板，条带的宽度被压窄了！

哪位大侠可以帮帮忙啊？！！！

真是郁闷啊！！！
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生活、目标、信仰、改变。。。
1楼 2010-04-11 21:22:15
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jAnmee

银虫 (正式写手)
★
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一个注意混合均匀，另一个注意缓冲液PH，配PH温度要室温。。我就在这个上面出过问题。。结果胶的质量总是有问题，后来一反思，调pH的时候溶液温度高了。
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国荣，家驹，MJ，为什么我喜欢的恩都死了。。。。
2楼2010-04-11 22:27:16
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weiyanbme

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by rivergf at 2010-04-11 21:22:15:
昨天我跑了一个SDS-PAGE，但配制的12%的分离胶上层界面是呈锯齿状的，这是为什么啊？？？？

最后我还是用这样的胶跑了电泳，今天终于脱完色，结果整块胶上的条到都压缩到又半侧，左半侧没有任何的条带！

因 ...

我上个星期也是第一次跑SDS-PAGE，结果是电压太高了，而且分离胶的浓度大了，条带只分布在分离胶的一半的位置，根本没跑出来；你说的那个情况是不是加水的时候里面有气泡啊，影响很大的；另外你的样品跟你的师姐的一样吗？条件不一定都适合，找到适合自己样品的条件是最重要的，祝实验顺利！！一起加油
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3楼2010-04-11 22:38:51
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
引用回帖:
Originally posted by rivergf at 2010-04-11 21:22:15:
昨天我跑了一个SDS-PAGE，但配制的12%的分离胶上层界面是呈锯齿状的，这是为什么啊？？？？

最后我还是用这样的胶跑了电泳，今天终于脱完色，结果整块胶上的条到都压缩到又半侧，左半侧没有任何的条带！

因 ...

看这里，注意灌胶操作！

您在凝胶时，胶面上要加一层水的。
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1262941
电压100 120 都不是问题。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2010-04-12 07:56:23
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horsw

木虫 (正式写手)
★
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把你的胶照片放上来，再详细描述整个实验过程，特别是你自认为可能出问题的细节，讲出来大家一起讨论一下
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5楼2010-04-12 08:17:14
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horsw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by weiyanbme at 2010-04-11 22:38:51:



我上个星期也是第一次跑SDS-PAGE，结果是电压太高了，而且分离胶的浓度大了，条带只分布在分离胶的一半的位置，根本没跑出来；你说的那个情况是不是加水的时候里面有气泡啊，影响很大的；另外你的样品跟你的 ...

如果溴酚蓝已经跑到底了，但是条带染色后发现集中于凝胶上半部，那可能是分离胶T%过大

如果溴酚蓝的位置跟最低条带差不多位置，那就要考虑是分离胶缓冲液出问题，pH，或者离子浓度。
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6楼2010-04-12 08:21:04
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dy_414

木虫 (正式写手)
★
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配胶的时候要混合均匀再灌胶
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我坚信，rp是攒出来的
7楼2010-04-12 08:30:54
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rinp

木虫 (正式写手)
★
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你这个电压就有问题，我们都是浓缩胶80V，大约半小时，分离胶120V跑到底的
锯齿的可能性比较多，一是你的胶不匀，没混合好二是可能产生了气泡，三是你配完了没用正丁醇封胶，等等
还有就是我们的胶都是现配先用，如果要放最多一两天，而且应该放在4度冰箱
lz出现这种问题的可能原因实在太多了
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海到无边天做岸山登绝顶我为峰.博士学位就是鞋里的一粒米，不拿不舒服，拿了不能吃！
8楼2010-04-12 09:29:31
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weiyanbme

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by horsw at 2010-04-12 08:21:04:


如果溴酚蓝已经跑到底了，但是条带染色后发现集中于凝胶上半部，那可能是分离胶T%过大

如果溴酚蓝的位置跟最低条带差不多位置，那就要考虑是分离胶缓冲液出问题，pH，或者离子浓度。

恩，谢谢哈，确实是分离胶浓度大了，在尝试配低浓度的
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9楼2010-04-12 12:56:45
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rivergf

铜虫 (小有名气)
谢谢您的提醒。 pH这一点 我的确没有太关注，因为我是直接按照《蛋白质技术手册》上做的 你这一说 我下次配胶时 会格外注意这一点！
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生活、目标、信仰、改变。。。
10楼2010-04-12 21:16:17
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