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crab1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教质粒线性化是指什么意思 已有8人参与

大家好,我想请教一下所谓质粒线性化指的是什么意思。我在做毕赤酵母表达,表达载体要线性化之后才能转化到酵母中。我使用Bgl II这个酶来酶切构建好的表达载体的质粒,切是切开了但是不知道是否线性化完全。请明白的朋友帮帮忙!
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

你可以同时做一个对照 使用你的酶之外的另一种容易切割的酶和这种酶进行双酶切,这样就能判断是否完全切割吧

[ Last edited by fungixx on 2010-4-9 at 15:43 ]
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-04-09 15:39:36
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

转一个e.coli,看看长不长就ok了
2楼2010-04-09 15:14:07
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genewind

金虫 (小有名气)

线性化就是单酶切,然后整合到酵母的基因组!
3楼2010-04-09 15:35:57
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liu2007

金虫 (小有名气)


amisking(金币+1): 2010-04-09 17:46
单酶切后,因为单酶切的质粒为线状构象,而没切开的质粒为环状,电泳能完全分开这两种构象,再回收线性化的条带用于转化就可以了。
也可以取少许酶切样品检测,发现单酶切切得很完全,就可直接用此样品纯化后做转化。
5楼2010-04-09 16:20:31
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