应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】请教质粒线性化是指什么意思
91/1返回列表
查看: 1961  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

crab1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教质粒线性化是指什么意思 已有8人参与

大家好，我想请教一下所谓质粒线性化指的是什么意思。我在做毕赤酵母表达，表达载体要线性化之后才能转化到酵母中。我使用Bgl II这个酶来酶切构建好的表达载体的质粒，切是切开了但是不知道是否线性化完全。请明白的朋友帮帮忙！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-04-09 15:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
转一个e.coli，看看长不长就ok了
赞一下 回复此楼
2楼2010-04-09 15:14:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genewind

金虫 (小有名气)
线性化就是单酶切，然后整合到酵母的基因组！
赞一下 回复此楼
3楼2010-04-09 15:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
你可以同时做一个对照 使用你的酶之外的另一种容易切割的酶和这种酶进行双酶切，这样就能判断是否完全切割吧

[ Last edited by fungixx on 2010-4-9 at 15:43 ]
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-04-09 15:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liu2007

金虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1): 2010-04-09 17:46
单酶切后，因为单酶切的质粒为线状构象，而没切开的质粒为环状，电泳能完全分开这两种构象，再回收线性化的条带用于转化就可以了。
也可以取少许酶切样品检测，发现单酶切切得很完全，就可直接用此样品纯化后做转化。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-04-09 16:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gundamba

木虫 (小有名气)
做个电泳就可以了，首先，线性化的质粒跑的比酶切之前的质粒慢，再者，线性化的质粒同MARKER比较，显示的是真实的大小，可以看你质粒大小来区分
赞一下 回复此楼
6楼2010-04-09 20:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crab1983

铜虫 (小有名气)
我酶切之后的质粒跑的比质粒快，是两条带能分出大小，这个质粒上有两个我用来线性化酶的酶切位点，所以我现在分不清这种情况是不是单酶切的结果。
赞一下 回复此楼
7楼2010-04-12 09:31:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
crab1983(金币+1): 2010-04-12 17:22
引用回帖:
Originally posted by crab1983 at 2010-04-12 09:31:44:
我酶切之后的质粒跑的比质粒快，是两条带能分出大小，这个质粒上有两个我用来线性化酶的酶切位点，所以我现在分不清这种情况是不是单酶切的结果。

你用的是哪个载体？一般线性化都是选择单一的酶切位点进行单交换重组的，你要切下整个表达元件做双交换？那肯定是要做回收的。另外的话，根据maker应该知道哪条是你需要的带，然后回收就可以了。

[ Last edited by susizheng on 2010-4-12 at 14:03 ]
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
8楼2010-04-12 14:02:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

银杏下

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by crab1983 at 2010-04-12 09:31:44:
我酶切之后的质粒跑的比质粒快，是两条带能分出大小，这个质粒上有两个我用来线性化酶的酶切位点，所以我现在分不清这种情况是不是单酶切的结果。

败给你了，这样也行。就不能选一个只有一个位点的？
赞一下 回复此楼
9楼2010-04-12 14:03:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 crab1983 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今年审到国自然15份，谈谈感受 +19 国自然国社科中 2026-05-17 20/1000 2026-05-20 14:14 by 仲夏夜的星星
[论文投稿] Sci. Bull. 悲剧经验 +4 jyang1999 2026-05-16 5/250 2026-05-20 13:49 by jyang1999
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +4 fummck 2026-05-20 4/200 2026-05-20 12:56 by Equinoxhua
[基金申请] 面上本子正文33页，违规吗？会被低分嘛？ +9 1234567wang 2026-05-17 11/550 2026-05-20 12:37 by zhuzg0628
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 6/300 2026-05-20 10:36 by xtlilibin
[考博] 如果工作了想读博，可以边工作边读全日制嘛？ 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[有机交流] 如何实现卤原子转化 +3 BT20230424 2026-05-15 8/400 2026-05-20 09:32 by xtlilibin
[基金申请] 河北省自然科学基金 +3 Peterchao 2026-05-18 3/150 2026-05-20 08:57 by 霸_霸
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +12 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 13/650 2026-05-20 08:34 by xli1984
[文学芳草园] 献血感触 +6 呀呀好傻 2026-05-19 11/550 2026-05-19 22:26 by 而立得乐
[基金申请] 2026山东省优青 +3 luckinging 2026-05-14 4/200 2026-05-19 16:15 by 52wls
[考博] 找博士生导师 +6 小代想上岸 2026-05-15 7/350 2026-05-19 10:22 by free_fisher
[考博] 26/27申博自荐-锂/钠电池方向 5+3 狗头军师. 2026-05-15 4/200 2026-05-19 09:10 by moonboat
[基金申请] 同样的基金本子，换个专家直接从C变A！ (金币-10) +3 国自然国社科中 2026-05-19 3/150 2026-05-19 08:50 by Equinoxhua
[基金申请] 别被青基扩招骗了！26年科研内卷才刚刚开始 +3 国自然国社科中 2026-05-14 4/200 2026-05-19 08:48 by archvillain
[考博] 2026博士还有哪些学校有名额 +7 小王求读研 2026-05-15 8/400 2026-05-19 08:27 by zhyzzh
[基金申请] 国自然上会要求 +5 无名者登山 2026-05-18 9/450 2026-05-18 17:50 by BlakeReary
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
[文学芳草园] 半夜喝咖啡 +3 myrtle 2026-05-15 5/250 2026-05-18 01:03 by 小沈2018
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 6/300 2026-05-16 19:46 by Equinoxhua
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭