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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】请教质粒线性化是指什么意思
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crab1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教质粒线性化是指什么意思 已有8人参与

大家好，我想请教一下所谓质粒线性化指的是什么意思。我在做毕赤酵母表达，表达载体要线性化之后才能转化到酵母中。我使用Bgl II这个酶来酶切构建好的表达载体的质粒，切是切开了但是不知道是否线性化完全。请明白的朋友帮帮忙！
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1楼 2010-04-09 15:03:47
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
转一个e.coli，看看长不长就ok了
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2楼2010-04-09 15:14:07
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genewind

金虫 (小有名气)
线性化就是单酶切，然后整合到酵母的基因组！
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3楼2010-04-09 15:35:57
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
你可以同时做一个对照 使用你的酶之外的另一种容易切割的酶和这种酶进行双酶切，这样就能判断是否完全切割吧

[ Last edited by fungixx on 2010-4-9 at 15:43 ]
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-04-09 15:39:36
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liu2007

金虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1): 2010-04-09 17:46
单酶切后，因为单酶切的质粒为线状构象，而没切开的质粒为环状，电泳能完全分开这两种构象，再回收线性化的条带用于转化就可以了。
也可以取少许酶切样品检测，发现单酶切切得很完全，就可直接用此样品纯化后做转化。
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5楼2010-04-09 16:20:31
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gundamba

木虫 (小有名气)
做个电泳就可以了，首先，线性化的质粒跑的比酶切之前的质粒慢，再者，线性化的质粒同MARKER比较，显示的是真实的大小，可以看你质粒大小来区分
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6楼2010-04-09 20:44:16
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crab1983

铜虫 (小有名气)
我酶切之后的质粒跑的比质粒快，是两条带能分出大小，这个质粒上有两个我用来线性化酶的酶切位点，所以我现在分不清这种情况是不是单酶切的结果。
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7楼2010-04-12 09:31:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
crab1983(金币+1): 2010-04-12 17:22
引用回帖:
Originally posted by crab1983 at 2010-04-12 09:31:44:
我酶切之后的质粒跑的比质粒快，是两条带能分出大小，这个质粒上有两个我用来线性化酶的酶切位点，所以我现在分不清这种情况是不是单酶切的结果。

你用的是哪个载体？一般线性化都是选择单一的酶切位点进行单交换重组的，你要切下整个表达元件做双交换？那肯定是要做回收的。另外的话，根据maker应该知道哪条是你需要的带，然后回收就可以了。

[ Last edited by susizheng on 2010-4-12 at 14:03 ]
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Thank-you，so-blue.
8楼2010-04-12 14:02:29
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银杏下

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by crab1983 at 2010-04-12 09:31:44:
我酶切之后的质粒跑的比质粒快，是两条带能分出大小，这个质粒上有两个我用来线性化酶的酶切位点，所以我现在分不清这种情况是不是单酶切的结果。

败给你了，这样也行。就不能选一个只有一个位点的？
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9楼2010-04-12 14:03:59
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