应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】请教质粒线性化是指什么意思
91/1返回列表
查看: 1885  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

crab1983

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教质粒线性化是指什么意思 已有8人参与

大家好，我想请教一下所谓质粒线性化指的是什么意思。我在做毕赤酵母表达，表达载体要线性化之后才能转化到酵母中。我使用Bgl II这个酶来酶切构建好的表达载体的质粒，切是切开了但是不知道是否线性化完全。请明白的朋友帮帮忙！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-04-09 15:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
转一个e.coli，看看长不长就ok了
赞一下 回复此楼
2楼2010-04-09 15:14:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genewind

金虫 (小有名气)
线性化就是单酶切，然后整合到酵母的基因组！
赞一下 回复此楼
3楼2010-04-09 15:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
你可以同时做一个对照 使用你的酶之外的另一种容易切割的酶和这种酶进行双酶切，这样就能判断是否完全切割吧

[ Last edited by fungixx on 2010-4-9 at 15:43 ]
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-04-09 15:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liu2007

金虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1): 2010-04-09 17:46
单酶切后，因为单酶切的质粒为线状构象，而没切开的质粒为环状，电泳能完全分开这两种构象，再回收线性化的条带用于转化就可以了。
也可以取少许酶切样品检测，发现单酶切切得很完全，就可直接用此样品纯化后做转化。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-04-09 16:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gundamba

木虫 (小有名气)
做个电泳就可以了，首先，线性化的质粒跑的比酶切之前的质粒慢，再者，线性化的质粒同MARKER比较，显示的是真实的大小，可以看你质粒大小来区分
赞一下 回复此楼
6楼2010-04-09 20:44:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crab1983

铜虫 (小有名气)
我酶切之后的质粒跑的比质粒快，是两条带能分出大小，这个质粒上有两个我用来线性化酶的酶切位点，所以我现在分不清这种情况是不是单酶切的结果。
赞一下 回复此楼
7楼2010-04-12 09:31:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
crab1983(金币+1): 2010-04-12 17:22
引用回帖:
Originally posted by crab1983 at 2010-04-12 09:31:44:
我酶切之后的质粒跑的比质粒快，是两条带能分出大小，这个质粒上有两个我用来线性化酶的酶切位点，所以我现在分不清这种情况是不是单酶切的结果。

你用的是哪个载体？一般线性化都是选择单一的酶切位点进行单交换重组的，你要切下整个表达元件做双交换？那肯定是要做回收的。另外的话，根据maker应该知道哪条是你需要的带，然后回收就可以了。

[ Last edited by susizheng on 2010-4-12 at 14:03 ]
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
8楼2010-04-12 14:02:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

银杏下

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by crab1983 at 2010-04-12 09:31:44:
我酶切之后的质粒跑的比质粒快，是两条带能分出大小，这个质粒上有两个我用来线性化酶的酶切位点，所以我现在分不清这种情况是不是单酶切的结果。

败给你了，这样也行。就不能选一个只有一个位点的？
赞一下 回复此楼
9楼2010-04-12 14:03:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 crab1983 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +5 ￣^￣゜汗 2026-03-19 7/350 2026-03-22 19:44 by 公瑾逍遥
[考研] 323求调剂 +5 洼小桶 2026-03-18 5/250 2026-03-22 17:38 by luoyongfeng
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境专硕，总分308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:39 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸！ 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 【同济软件】软件（085405）考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭