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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA 电泳图谱 求解
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【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 441273385 的 18 个金币

441273385

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA 电泳图谱 求解已有5人参与

这是从人胰腺癌细胞中提取的DNA 做的电泳图
上样量：15ul ， 1%的琼脂糖凝胶电泳，100V恒压 1h， EB染色30min    从左到右依次为：marker，空白，低浓度.....高浓度，marker
请问下这么多拖尾是咋回事，DNA梯度电泳咋没有呢？也做了上样量是5，10，20ul的 图也差不多一个样子                                                   


[ Last edited by 441273385 on 2010-4-7 at 10:54 ]
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1楼2010-04-07 10:50:40
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
441273385(金币+1): 2010-04-07 11:06
1949stone(金币+1): 2010-04-07 13:22
新鲜组织有的时候是这个样子的，有时是RNA的原因，可以用RNA酶消化一下看看效果，其实冰箱里放一段时间再捡测可能就好了，我觉得DNA质量还可以，但是浓度不高，15ul点样量，我上DNA都是2ul
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2楼2010-04-07 11:03:17
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441273385

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-07 11:03:17:
新鲜组织有的时候是这个样子的，有时是RNA的原因，可以用RNA酶消化一下看看效果，其实冰箱里放一段时间再捡测可能就好了，我觉得DNA质量还可以，但是浓度不高，15ul点样量，我上DNA都是2ul

请问我看有的DNA 电泳加药高浓度时都明显的梯度出现 我的为啥没有呢 您说的质量还可以是指哪方面呢 您上样上2ul染色后颜色能看清楚么 谢谢啦
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3楼2010-04-07 11:06:23
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leon198418029

金虫 (小有名气)

research associate
引用回帖:
Originally posted by 441273385 at 2010-04-07 10:50:40:
这是从人胰腺癌细胞中提取的DNA 做的电泳图
上样量：15ul ， 1%的琼脂糖凝胶电泳，100V恒压 1h， EB染色30min    从左到右依次为：marker，空白，低浓度.....高浓度，marker
请问下这么多拖尾是咋回事，DNA梯度 ...

空白泳道有了拖尾，看来是被污染了。在加样孔附近，七条泳道都有一条亮带，是不是预期大小的DNA片段？至于拖尾，可能是提取DNA的时候，DNA被破碎， 一些细小的DNA碎片的造成的，建议优化提取方法。
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不忘初心，为梦远行。
4楼2010-04-07 11:08:19
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DNAhelix

银虫 (著名写手)
★
1949stone(金币+1): 2010-04-07 13:22
楼主应该是检测细胞凋亡DNA Ladder吧，可以弄个阳性对照。
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智慧活法：不生气，不计较！
5楼2010-04-07 11:12:11
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441273385

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by leon198418029 at 2010-04-07 11:08:19:


空白泳道有了拖尾，看来是被污染了。在加样孔附近，七条泳道都有一条亮带，是不是预期大小的DNA片段？至于拖尾，可能是提取DNA的时候，DNA被破碎， 一些细小的DNA碎片的造成的，建议优化提取方法。

因为初涉这方面 很多地方不懂  请问下污染具体指哪方面呢
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6楼2010-04-07 11:15:57
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441273385

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by DNAhelix at 2010-04-07 11:12:11:
楼主应该是检测细胞凋亡DNA Ladder吧，可以弄个阳性对照。

请问下 您做过的出现过这情况么 我重复提取 做了两次了 都是这个样子 不知道哪儿出问题了 很是愁人
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7楼2010-04-07 11:21:00
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DNAhelix

银虫 (著名写手)
★ ★
441273385(金币+1): 2010-04-07 12:01
1949stone(金币+2): 2010-04-07 13:22
引用回帖:
Originally posted by 441273385 at 2010-04-07 11:21:00:

请问下 您做过的出现过这情况么 我重复提取 做了两次了 都是这个样子 不知道哪儿出问题了 很是愁人

实验室有人做过。
你最好采取其他方法使细胞发生凋亡作为阳性对照，再与阴性对照（不发生凋亡的）及目的样品一起平行操作，这样才容易找到问题所在。

个人觉得楼主目前最重要是确定加药后细胞是否发生凋亡，确实发生凋亡再摸索实验条件跑个漂亮的图才有意义。
还是建议弄个阳性对照吧！

[ Last edited by DNAhelix on 2010-4-7 at 11:35 ]
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智慧活法：不生气，不计较！
8楼2010-04-07 11:27:05
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441273385

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by DNAhelix at 2010-04-07 11:27:05:


实验室有人做过。
你最好采取其他方法使细胞发生凋亡作为阳性对照，再与阴性对照（不发生凋亡的）及目的样品一起平行操作，这样才容易找到问题所在。

个人觉得楼主目前最重要是确定加药后细胞是否发生凋亡 ...

奥 我采用顺铂加药作个阳性对照试试，关于凋亡我做了加药后的形态学观察，caspase-3活性测定，western检测了 都出凋亡的结果了，就DNA ladder电泳这块不出结果    谢谢你了
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9楼2010-04-07 11:56:06
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3): 2010-04-07 12:46
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Originally posted by 441273385 at 2010-04-07 11:06:23:

请问我看有的DNA 电泳加药高浓度时都明显的梯度出现 我的为啥没有呢 您说的质量还可以是指哪方面呢 您上样上2ul染色后颜色能看清楚么 谢谢啦

我上样2ul亮度和你这个差不多或者更亮，所以我说你这个浓度不高，但是只要有DNA下一步PCR都应该没有问题的。至于没有梯度，我觉得按照你的DNA浓度，点样差10ul不会有太大差别是正常的，因为DNA浓度在数量级上有差别的话，亮度才会有明显差异。
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10楼2010-04-07 12:31:28
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