24小时热门版块排行榜    

查看: 1394  |  回复: 7
当前主题已经存档。

bihaiqingt

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】非变性凝胶电泳和变性凝胶电泳 已有5人参与

需要做非变性凝胶电泳分离蛋白,不知道和变性凝胶电泳有什么区别,请教各位!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DNAhelix

银虫 (著名写手)

★
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-06 19:49
非变性电泳分离的是完整蛋白质(即单体,二聚体或多聚体),而变性凝胶电泳分离的是一个个亚基,即变性的蛋白亚基。
智慧活法:不生气,不计较!
2楼2010-04-06 19:26:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyg7720349

铜虫 (小有名气)

当然有了,首先是最后得到的成分不一样,其次变性的药稍微麻烦点。
望大家都各有所获!
3楼2010-04-06 21:56:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-07 12:34
差别还是有的,具体操作更是有很多细节不一样, 从配胶到电泳缓冲液均不能含有变性剂,还要考虑蛋白的等电点等等。。。
4楼2010-04-06 23:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bihaiqingt

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by mwgyanchu at 2010-04-06 23:32:22:
差别还是有的,具体操作更是有很多细节不一样, 从配胶到电泳缓冲液均不能含有变性剂,还要考虑蛋白的等电点等等。。。

等电点的影响很大吗?看书上说,在分离碱性蛋白质时,要利用低PH凝胶系统,我的蛋白等电点5.0左右,请问该如何是好?
5楼2010-04-07 08:34:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
非变性电泳的条件都要摸索的,首先要看你的蛋白大小,再确定配胶的浓度,一般比变性电泳低,非变性电泳主要是靠蛋白在电泳液中自身所带的负电荷,而且所带电荷量比较小,电泳缓冲液的PH值调至8左右即可。另外电泳条件,电压一定不能太高,尽量控制在低温进行。
6楼2010-04-07 15:38:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

boystrong

银虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
变性PAGE与非变性PAGE我做过很多,给个E-MAIL我发给你我的大论文,具体有很多关于这个方面的实验。
两个主要区别:1,对上样前的蛋白处理:变性蛋白——顾名思义,上样前,蛋白需要变性(主要方式是加loading buffer在沸水中煮约5min,非变性的蛋白需要有活性,所以尽量保持其在体内的活性或者部分保存,例如凝胶阻滞实验方面就是利用蛋白与特异DNA之间有识别的功能,蛋白与DNA能够结合起来,在胶内跑起来的效果就不一样——注意,这些DNA一般都是用P32标记的,或者现在流行的荧光染色);
2,胶的配的办法
查阅一本书就可以了,具体名字我忘记了,是影印版本的
3,以及两者应用的区域。
当然一个是变性蛋白一个是非变性的
梦想追风
7楼2010-04-07 16:54:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bihaiqingt

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by boystrong at 2010-04-07 16:54:06:
变性PAGE与非变性PAGE我做过很多,给个E-MAIL我发给你我的大论文,具体有很多关于这个方面的实验。
两个主要区别:1,对上样前的蛋白处理:变性蛋白——顾名思义,上样前,蛋白需要变性(主要方式是加loading bu ...

bihaiqingtian1119@163.com,谢谢
8楼2010-04-07 18:13:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 bihaiqingt 的主题更新
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:40 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 XJXMuRjD7cK7 2026-11-13 3/150 2026-11-15 07:23 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 XJXMuRjD7cK7 2026-11-13 4/200 2026-11-15 07:12 by xSrQNSSjcgoX
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 XJXMuRjD7cK7 2026-11-13 4/200 2026-11-15 07:01 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-13 3/150 2026-11-15 05:00 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-15 00:35 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 8/400 2026-11-14 22:20 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:48 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 6/300 2026-11-12 12:42 by ECLTXnJnRSXf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 5/250 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 7/350 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:14 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:43 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-12 09:21 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 5/250 2026-11-12 08:15 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 07:09 by 9fOTqj074tIg
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:30 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-12 00:44 by 9fOTqj074tIg
信息提示
请填处理意见