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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】非变性凝胶电泳和变性凝胶电泳
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bihaiqingt

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】非变性凝胶电泳和变性凝胶电泳 已有5人参与

需要做非变性凝胶电泳分离蛋白，不知道和变性凝胶电泳有什么区别，请教各位！
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1楼 2010-04-06 16:44:31
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DNAhelix

银虫 (著名写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-06 19:49
非变性电泳分离的是完整蛋白质（即单体，二聚体或多聚体），而变性凝胶电泳分离的是一个个亚基，即变性的蛋白亚基。
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智慧活法：不生气，不计较！
2楼2010-04-06 19:26:18
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)
当然有了，首先是最后得到的成分不一样，其次变性的药稍微麻烦点。
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望大家都各有所获！
3楼2010-04-06 21:56:45
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mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-07 12:34
差别还是有的，具体操作更是有很多细节不一样， 从配胶到电泳缓冲液均不能含有变性剂，还要考虑蛋白的等电点等等。。。
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4楼2010-04-06 23:32:22
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bihaiqingt

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by mwgyanchu at 2010-04-06 23:32:22:
差别还是有的，具体操作更是有很多细节不一样， 从配胶到电泳缓冲液均不能含有变性剂，还要考虑蛋白的等电点等等。。。

等电点的影响很大吗？看书上说，在分离碱性蛋白质时，要利用低PH凝胶系统，我的蛋白等电点5.0左右，请问该如何是好？
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5楼2010-04-07 08:34:14
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mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
非变性电泳的条件都要摸索的，首先要看你的蛋白大小，再确定配胶的浓度，一般比变性电泳低，非变性电泳主要是靠蛋白在电泳液中自身所带的负电荷，而且所带电荷量比较小，电泳缓冲液的PH值调至8左右即可。另外电泳条件，电压一定不能太高，尽量控制在低温进行。
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6楼2010-04-07 15:38:22
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boystrong

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
变性PAGE与非变性PAGE我做过很多，给个E-MAIL我发给你我的大论文，具体有很多关于这个方面的实验。
两个主要区别：1，对上样前的蛋白处理：变性蛋白——顾名思义，上样前，蛋白需要变性（主要方式是加loading buffer在沸水中煮约5min，非变性的蛋白需要有活性，所以尽量保持其在体内的活性或者部分保存，例如凝胶阻滞实验方面就是利用蛋白与特异DNA之间有识别的功能，蛋白与DNA能够结合起来，在胶内跑起来的效果就不一样——注意，这些DNA一般都是用P32标记的，或者现在流行的荧光染色）；
2，胶的配的办法
查阅一本书就可以了，具体名字我忘记了，是影印版本的
3，以及两者应用的区域。
当然一个是变性蛋白一个是非变性的
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梦想追风
7楼2010-04-07 16:54:06
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bihaiqingt

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by boystrong at 2010-04-07 16:54:06:
变性PAGE与非变性PAGE我做过很多，给个E-MAIL我发给你我的大论文，具体有很多关于这个方面的实验。
两个主要区别：1，对上样前的蛋白处理：变性蛋白——顾名思义，上样前，蛋白需要变性（主要方式是加loading bu ...

bihaiqingtian1119@163.com,谢谢
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8楼2010-04-07 18:13:56
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