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bihaiqingt

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】非变性凝胶电泳和变性凝胶电泳 已有5人参与

需要做非变性凝胶电泳分离蛋白,不知道和变性凝胶电泳有什么区别,请教各位!
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DNAhelix

银虫 (著名写手)

★
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-06 19:49
非变性电泳分离的是完整蛋白质(即单体,二聚体或多聚体),而变性凝胶电泳分离的是一个个亚基,即变性的蛋白亚基。
智慧活法:不生气,不计较!
2楼2010-04-06 19:26:18
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lyg7720349

铜虫 (小有名气)

当然有了,首先是最后得到的成分不一样,其次变性的药稍微麻烦点。
望大家都各有所获!
3楼2010-04-06 21:56:45
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mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-07 12:34
差别还是有的,具体操作更是有很多细节不一样, 从配胶到电泳缓冲液均不能含有变性剂,还要考虑蛋白的等电点等等。。。
4楼2010-04-06 23:32:22
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bihaiqingt

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by mwgyanchu at 2010-04-06 23:32:22:
差别还是有的,具体操作更是有很多细节不一样, 从配胶到电泳缓冲液均不能含有变性剂,还要考虑蛋白的等电点等等。。。

等电点的影响很大吗?看书上说,在分离碱性蛋白质时,要利用低PH凝胶系统,我的蛋白等电点5.0左右,请问该如何是好?
5楼2010-04-07 08:34:14
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mwgyanchu

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
非变性电泳的条件都要摸索的,首先要看你的蛋白大小,再确定配胶的浓度,一般比变性电泳低,非变性电泳主要是靠蛋白在电泳液中自身所带的负电荷,而且所带电荷量比较小,电泳缓冲液的PH值调至8左右即可。另外电泳条件,电压一定不能太高,尽量控制在低温进行。
6楼2010-04-07 15:38:22
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boystrong

银虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
变性PAGE与非变性PAGE我做过很多,给个E-MAIL我发给你我的大论文,具体有很多关于这个方面的实验。
两个主要区别:1,对上样前的蛋白处理:变性蛋白——顾名思义,上样前,蛋白需要变性(主要方式是加loading buffer在沸水中煮约5min,非变性的蛋白需要有活性,所以尽量保持其在体内的活性或者部分保存,例如凝胶阻滞实验方面就是利用蛋白与特异DNA之间有识别的功能,蛋白与DNA能够结合起来,在胶内跑起来的效果就不一样——注意,这些DNA一般都是用P32标记的,或者现在流行的荧光染色);
2,胶的配的办法
查阅一本书就可以了,具体名字我忘记了,是影印版本的
3,以及两者应用的区域。
当然一个是变性蛋白一个是非变性的
梦想追风
7楼2010-04-07 16:54:06
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bihaiqingt

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by boystrong at 2010-04-07 16:54:06:
变性PAGE与非变性PAGE我做过很多,给个E-MAIL我发给你我的大论文,具体有很多关于这个方面的实验。
两个主要区别:1,对上样前的蛋白处理:变性蛋白——顾名思义,上样前,蛋白需要变性(主要方式是加loading bu ...

bihaiqingtian1119@163.com,谢谢
8楼2010-04-07 18:13:56
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