| 查看: 1338 | 回复: 11 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】紧急求助!关于细菌总DNA提取与16SRDNA的PCR问题!已有6人参与
|
|||
|
我做的是从未知细菌提取总DNA,然后16SRDNA的PCR鉴定.遇到如下问题: 问题一:在提取DNA的时候是先收集4ml菌液,用10μl 10mg/ml的溶菌酶+0.5 ml溶液A(10g/L无水葡萄糖 25mmol/L Tris-HCl 10mmol/L EDTA)悬浮细胞,然后加20μl蛋白酶K(20 mg/ml)轻柔混匀,就现此时溶液变成十分粘稠的胶状物,以至于后面的酚抽提的时候上清液也十分粘稠,几乎吸不出上清,甚至后面提出的DNA也是粘稠状的,电泳出来DNA扩散很大.不知道为什么会出现粘稠??? 问题二:上面总共有是个不同的样品,总DNA电泳出来看起来都差不多,但是P了许多次,只有其中一个样能P出来,不知道怎么回事? 高手们,请帮帮小弟啊,初来些论坛,没有金币........ 补充:今天我又提了一次,发现不是加了蛋白酶K的时候出现的粘稠,而是之后加了25μl的10%SDS之后马上就出现了粘稠,之后的所的步骤都有粘稠.后面提出来的DNA里都有粘稠物,并且电泳出来的DNA条带很弱.4个样品里只有一个样能很清楚的看到DNA带.....我没提出来DNA的菌是一种涂料里的污染菌,提出DNA的菌是红茶菌里的一种阳性细菌,不知道这和菌的种类是不是有关系? [ Last edited by wwsw38 on 2010-4-6 at 21:04 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有253人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
8楼2010-04-06 09:16:03
yujiaping1
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1365.2
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 1174
- 在线: 66.6小时
- 虫号: 929883
- 注册: 2009-12-17
- 性别: MM
- 专业: 疫苗学
2楼2010-04-05 23:57:07
3楼2010-04-06 00:01:04
charon1982
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 58 (初中生)
- 金币: 5106.2
- 散金: 350
- 红花: 12
- 帖子: 1250
- 在线: 469.8小时
- 虫号: 224872
- 注册: 2006-03-22
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2010-04-06 02:03:53