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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助 PCR空白总是有条带
汕头大学海洋科学接受调剂
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mlcrazy9596

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助 PCR空白总是有条带 已有11人参与



想鉴定细菌的种类，用16s的通用引物去PCR，但是空白的总是有条带！用的是天根的mix，刚拆的，引物是别人的，一直用没问题！不知道怎么回事！！
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1楼 2010-04-05 18:24:49
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):谢谢交流！:tiger06: 2010-04-05 19:23
你的水呢，是天根配的水吗？16s是很容易污染的，如果楼主是测序，按图上的情况影响不大，估计测序不会有问题，但是楼主最好不要只测一个菌，测两三个，结果一致就能保证准确了，怕只测一个，真的是来自污染菌的16s
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2楼2010-04-05 19:08:44
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mlcrazy9596

金虫 (小有名气)
scelab:全套换掉~ 2010-04-05 21:53
我就是用来菌种鉴定的啊 ！！！哎。。。。用的也是天根自带的双蒸水。
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3楼2010-04-05 19:54:51
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
scelab(金币+1):谢谢交流！:tiger06: 2010-04-05 22:42
估计天根的酶应该是不会有问题，在超净工作台加样，枪头、管都灭菌处理好，我感觉还是操作的问题。
引物污染的可能性也比较大，别人用的没问题，但你用来稀释的水有没有问题

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-4-5 at 22:30 ]
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4楼2010-04-05 22:29:19
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csjiang1123

木虫 (小有名气)
★ ★
mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):谢谢交流！:tiger06: 2010-04-05 22:42
我估计也是引物的问题，引物是容易污染的，我也遇到了同样的问题，逐个条件排除就是引物问题。
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5楼2010-04-05 22:38:06
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xiangao

金虫 (正式写手)
★
mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
一切与之接触的都有可能带来污染
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6楼2010-04-05 22:47:15
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
★
mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
16S做菌种鉴定的话,污染因素很多的,只能一个个排除了,酶,水,引物,DNTP,枪,PCR管,实在不行也可以用别人的体系做一次.
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7楼2010-04-05 23:56:49
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★
mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
A，操作不谨慎
B，重组酶残留
C，气溶胶
D，以上都选
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8楼2010-04-06 09:52:23
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mlcrazy9596

金虫 (小有名气)
气溶胶，也能产生上面那样的空白条带？？？
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9楼2010-04-06 10:03:09
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huangqihong

铁虫 (小有名气)
★
mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
就像上面各位说的，可能受污染了，而且因素很多，另外是不是电泳时点样的问题？我看你的样品亮度很高，会不会是点样时旁边的样品过多溢过去的，才造成空白的那条浅带？
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10楼2010-04-06 10:28:21
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