24小时热门版块排行榜    

查看: 835  |  回复: 17
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 mlcrazy9596 的 9 个金币 ,回帖就立即获得 1 个金币,每人有 1 次机会

mlcrazy9596

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助 PCR空白总是有条带 已有11人参与



想鉴定细菌的种类,用16s的通用引物去PCR,但是空白的总是有条带!用的是天根的mix,刚拆的,引物是别人的,一直用没问题!不知道怎么回事!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)

★ ★
mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):谢谢交流!:tiger06: 2010-04-05 19:23
你的水呢,是天根配的水吗?16s是很容易污染的,如果楼主是测序,按图上的情况影响不大,估计测序不会有问题,但是楼主最好不要只测一个菌,测两三个,结果一致就能保证准确了,怕只测一个,真的是来自污染菌的16s
2楼2010-04-05 19:08:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlcrazy9596

金虫 (小有名气)

scelab:全套换掉~ 2010-04-05 21:53
我就是用来菌种鉴定的啊 !!!哎。。。。用的也是天根自带的双蒸水。
3楼2010-04-05 19:54:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)


scelab(金币+1):谢谢交流!:tiger06: 2010-04-05 22:42
估计天根的酶应该是不会有问题,在超净工作台加样,枪头、管都灭菌处理好,我感觉还是操作的问题。
引物污染的可能性也比较大,别人用的没问题,但你用来稀释的水有没有问题

[ Last edited by yujiaping1 on 2010-4-5 at 22:30 ]
4楼2010-04-05 22:29:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

csjiang1123

木虫 (小有名气)

★ ★
mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+1):谢谢交流!:tiger06: 2010-04-05 22:42
我估计也是引物的问题,引物是容易污染的,我也遇到了同样的问题,逐个条件排除就是引物问题。
5楼2010-04-05 22:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)


mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
一切与之接触的都有可能带来污染
6楼2010-04-05 22:47:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝色基因

金虫 (正式写手)


mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
16S做菌种鉴定的话,污染因素很多的,只能一个个排除了,酶,水,引物,DNTP,枪,PCR管,实在不行也可以用别人的体系做一次.
7楼2010-04-05 23:56:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主


mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
A,操作不谨慎
B,重组酶残留
C,气溶胶
D,以上都选
8楼2010-04-06 09:52:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlcrazy9596

金虫 (小有名气)

气溶胶,也能产生上面那样的空白条带???
9楼2010-04-06 10:03:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangqihong

铁虫 (小有名气)


mlcrazy9596(金币+1):谢谢参与
就像上面各位说的,可能受污染了,而且因素很多,另外是不是电泳时点样的问题?我看你的样品亮度很高,会不会是点样时旁边的样品过多溢过去的,才造成空白的那条浅带?
10楼2010-04-06 10:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mlcrazy9596 的主题更新
提示: 如果您在30分钟内回复过其他散金贴,则可能无法领取此贴金币
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见