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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌转化筛选
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j2

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌转化筛选 已有4人参与

我是将约3600bp质粒和1900bp基因重组，将重组质粒转入大肠杆菌，涂的平板，24h小时内长出蓝色菌。但提出的质粒但酶切是约7000bp，双酶切后也只有3600bp的一条带。难道是2段质粒连了？质粒上不该有lacZ的，怎么菌还是变蓝了。请教下高手，该怎么办~
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
1楼 2010-04-04 12:32:59
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
不太明白 是蓝白斑筛选吗  蓝斑应该是没有连进去的啊；
你用的是什么载体？
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-04-04 13:41:03
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j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-04-04 13:41:03:
不太明白 是蓝白斑筛选吗  蓝斑应该是没有连进去的啊；
你用的是什么载体？

用的蓝白斑筛选原理，但质粒是不表达lacZ的，连接去的基因才表达，所以挑篮色菌落
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
3楼2010-04-04 13:51:10
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
楼主用的什么质粒？确定不含LAC？
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4楼2010-04-04 16:54:14
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j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-04 16:54:14:
楼主用的什么质粒？确定不含LAC？

不含。加进去的基因才含
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
5楼2010-04-04 17:08:31
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
那么楼主有没有看到白色菌落呢？
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6楼2010-04-04 19:16:18
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j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-04 19:16:18:
那么楼主有没有看到白色菌落呢？

有的~
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
7楼2010-04-04 19:47:01
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j2

木虫 (正式写手)
拜托大家帮帮忙~~~毕不了业了
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
8楼2010-04-05 09:23:19
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waiter

木虫 (著名写手)

蛋白纯化系统（国产AKTA）销售


帮你顶起！！
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9楼2010-04-05 10:16:39
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
j2(金币+2):谢谢你一直的关注及帮助~ 2010-04-05 11:01
按照楼主的做法，不应该有问题，楼主多挑几个菌试试吧，我觉得按理说应该是插进去了，再有就是楼主的片段1900也不算小了，延长连接时间再试试吧

我最近克隆也怪事连篇，蓝白筛选，白斑很多，挑完菌之后不是没有插入就是片段太小，怀疑实验室质粒污染，讨厌死了
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10楼2010-04-05 10:38:37
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