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j2

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌转化筛选已有4人参与

我是将约3600bp质粒和1900bp基因重组,将重组质粒转入大肠杆菌,涂的平板,24h小时内长出蓝色菌。但提出的质粒但酶切是约7000bp,双酶切后也只有3600bp的一条带。难道是2段质粒连了?质粒上不该有lacZ的,怎么菌还是变蓝了。请教下高手,该怎么办~
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修炼ing,当虫仙……
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

不太明白 是蓝白斑筛选吗  蓝斑应该是没有连进去的啊;
你用的是什么载体?
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-04-04 13:41:03
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j2

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-04-04 13:41:03:
不太明白 是蓝白斑筛选吗  蓝斑应该是没有连进去的啊;
你用的是什么载体?

用的蓝白斑筛选原理,但质粒是不表达lacZ的,连接去的基因才表达,所以挑篮色菌落
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3楼2010-04-04 13:51:10
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

楼主用的什么质粒?确定不含LAC?
4楼2010-04-04 16:54:14
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j2

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-04 16:54:14:
楼主用的什么质粒?确定不含LAC?

不含。加进去的基因才含
修炼ing,当虫仙……
5楼2010-04-04 17:08:31
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

那么楼主有没有看到白色菌落呢?
6楼2010-04-04 19:16:18
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j2

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-04 19:16:18:
那么楼主有没有看到白色菌落呢?

有的~
修炼ing,当虫仙……
7楼2010-04-04 19:47:01
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j2

木虫 (正式写手)

拜托大家帮帮忙~~~毕不了业了
修炼ing,当虫仙……
8楼2010-04-05 09:23:19
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waiter

木虫 (著名写手)

蛋白纯化系统(国产AKTA)销售


帮你顶起!!
9楼2010-04-05 10:16:39
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

j2(金币+2):谢谢你一直的关注及帮助~ 2010-04-05 11:01
按照楼主的做法,不应该有问题,楼主多挑几个菌试试吧,我觉得按理说应该是插进去了,再有就是楼主的片段1900也不算小了,延长连接时间再试试吧

我最近克隆也怪事连篇,蓝白筛选,白斑很多,挑完菌之后不是没有插入就是片段太小,怀疑实验室质粒污染,讨厌死了
10楼2010-04-05 10:38:37
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